论文部分内容阅读
[摘要] 目的 探讨膜细胞骨架连接蛋白Ezrin在乳腺癌中的表达及其与临床病理参数之间的关系。方法采用免疫组化方法检测54例乳腺浸润性导管癌组织中Ezrin蛋白的表达,选择非典型增生5例,纤维囊性乳腺病9例和男性乳腺发育症2例作为对照。结果在乳腺浸润性导管癌中,有淋巴结转移组Ezrin的表达高于无淋巴结转移组。结论Ezrin与乳腺浸润性导管癌的浸润和转移密切相关,可以作为预测乳腺浸润性导管癌淋巴结转移的重要肿瘤标志物。
[关键词] Ezrin;乳腺肿瘤;淋巴结转移;肿瘤标志物
[中图分类号] R737.9[中图分类号] A[文章编号] 1673-9701(2009)24-168-02
乳腺癌是最常见的恶性肿瘤之一,约占妇女全部癌症的1/4,多年以来,乳腺癌发病率以经济发达国家最高。但近年来,我国妇女乳腺癌的发病率逐年升高,并有发病年龄降低的趋势。膜细胞骨架蛋白Ezrin是ERM(Ezrin-radixin-moesin)家族成员之一,通过连接细胞骨架和细胞膜,对细胞黏附、形态、分化、运动等起重要调节作用。近来研究表明,Ezrin促进肿瘤转移[1,2]。Andrea 等[3]运用消减杂交技术发现,在鼠乳腺癌细胞株中Ezrin 是一个肿瘤转移基因。Ezrin 蛋白的C末端与细胞骨架的肌动蛋白相连,N 末端则可通过与细胞表面黏附分子cadherin、CD44 等连接,调节细胞-细胞及细胞-细胞外基质之间的黏附,从而影响肿瘤细胞侵袭性等生物学行为[4,5]。本研究通过免疫组化方法观察Ezrtin在乳腺浸润性导管癌组织中的表达情况,来探讨Ezrin与乳腺浸润性导管癌侵袭转移的关系。
1材料与方法
1.1材料来源
收集本院2005～2007年乳腺切除或单纯性乳腺包块的组织标本70例,其中,非典型增生5例,纤维囊性乳腺病9例和男性乳腺发育症2例作为对照,浸润性导管癌54例,其中22例伴淋巴结转移;全部病理均经组织病理学证实。
1.2方法
采用免疫组织化学(IHC)S-P法,4μm厚的连续切片,抗原修复采用高温高压法,S-P试剂及Ezrin单克隆浓缩型抗体均购置福州迈新生物技术有限公司(1∶300)稀释,每次实验均用已知阳性切片做阳性对照,用PBS代替一抗做阴性对照,DAB显色,苏木素复染,中性树胶封片,显微镜随机选取5个视野,每个视野计数1000个细胞。
1.3结果判定
Ezrin阳性反应为细胞膜及细胞浆的棕黄染色,呈均一弥漫性分布,按染色强度和阳性表达细胞数,参考Mathew等分级标准:-,无表达; ,<50%细胞阳性表达或染色较浅; ,≥50%阳性表达且深染。( )称为强阳性。
1.4统计学方法
采用统计软件SPSS10.0进行统计学分析,采用卡方检验及Speaman等级相关分析,P<0.05表明差异有显著性。
2结果
2.1Ezrin 在良性乳腺增生组织中的表达
在良性乳腺增生组织中,Ezrin主要分布在腺导管上皮和腺泡上皮细胞胞膜,呈阳性棕黄色颗粒着色(图1)。
Ezrin在乳腺浸润性导管癌中有33例异常表达(33/54, 61.11%),其中在32例无转移的癌组织中有15例异常表达(15/32,53.12%),而在22例有淋巴结转移的癌组织中16例异常表达(16/22,72.73%)。x2检验表明,Ezrin 在无转移的癌组织中的异常表达率较有转移的癌组织明显减低,二者之间差异有显著性(x2=4.261,P=0.039)。Ezrin的异常表达与乳腺癌转移淋巴结数量的多少密切相关,转移淋巴结数量越多,Ezrin 的阳性表达率越高(x2=4.234,P=0.040)。见表1。
3讨论
侵袭和转移是恶性肿瘤的主要生物学特征,是导致手术、放疗及化疗等治疗失败和患者死亡的最主要原因,也是一个极其复杂、多步骤的过程,包括癌细胞从原发部位脱落,结合并降解基底膜;癌细胞侵入血管、淋巴管;癌细胞在循环中运行和滞留;最后穿出血管、淋巴管并增殖形成转移灶。研究表明,Ezrin在肿瘤的侵袭和转移中扮演重要角色[8,9]。Ezrin是ERM蛋白家族(Ezrin,Radixin和Moesin)中研究较深入的细胞内骨架蛋白,通过其C-,N-末端分别与细胞骨架和细胞膜蛋白的结合,形成专门的膜区域结构,调节细胞活动如生存、黏附、迁移、侵袭,这些活动在肿瘤发展和进程中都是非常重要的[10]。Ezrin 可作为酪氨酸-磷酸激酶的作用底物,在跨膜信号中发挥调节信号转导和细胞对信号的反应功能。Khanna等[2]研究发现,促进细胞的生存的MAPK和Akt的活性随着Ezrin的表达减少而降低。在肿瘤进程的晚期转移中,不是Akt而是MAPK途径增加了Ezrin低表达细胞的转移优势,这说明Ezrin可能调控多条信号通路来促进肿瘤转移。另外,Yu等[1]研究发现小GTP酶Rho和Ezrin相关的转移潜能有密切联系,通过影响细胞骨架肌动蛋白和细胞形态,调控细胞的黏附和活动[9]。由此看出,Ezrin可能是多条信号通路的交叉点。
Ezrin在不同组织中表达情况不一样。研究表明,Ezrin 在前列腺癌和子宫内膜腺癌中表达高于其对应的良性病变,而在结肠癌中其表达低于正常组织[8]。本研究数据表明Ezrin在乳腺浸润性导管癌中的表达明显高于良性病变,且有淋巴结转移者比无转移者更明显,两者差异有统计学意义,这说明,Ezrin 在乳腺癌中对肿瘤发生淋巴转移有着重要的促进作用。
纤维囊性乳腺病是乳腺癌的癌前病变,而合并导管上皮非典型增生的纤维囊性乳腺病更是乳腺癌的前驱病变,本研究数据表明Ezrin在乳腺癌中的表达明显高于良性病变,这就提示Ezrin在乳腺癌发生的前期可能发挥了一定的作用。通过进一步的分析乳腺癌组织Ezrin高表达的临床意义发现Ezrin的表达与患者的年龄、肿瘤组织学类型等无关,而与淋巴结转移与否有关,在有淋巴结转移者Ezrin表达最高,这进一步说明Ezrin对肿瘤的发生淋巴结转移有着重要的促进作用。这与Yu等和Khanna等的研究Ezrin蛋白与肿瘤的转移能力高度相关的结果相一致。
很多实验证明肿瘤的转移与细胞表面分子(CD44、Met)关系密切,而Ezrin蛋白可以和他们发生作用,可能参与到肿瘤转移的过程中,在对神经系统肿瘤、结肠癌等研究中发现Ezrin蛋白可直接或间接与细胞表面黏附分子E-cadherin和CD44等结合而调节瘤细胞的黏附性,影响肿瘤的侵袭性和转移。近年来,在对前列腺癌、食管癌、胰腺癌、卵巢癌和横纹肌肉瘤等的研究发现,在几种癌症类型中的高表达,都提示Ezrin与这些恶性肿瘤的发生、发展以及转移有关。我们观察到,Ezrin在浸润性乳腺导管癌组织中高表达,在有淋巴结转移的原发癌灶中这种异常表达更明显,有局部淋巴结转移者的异常表达率明显高于无局部淋巴结转移者,两者之间差异呈显著的正相关。一方面,在机体正常情况下,Ezrin发挥正常作用维持细胞形态;另一方面,随着肿瘤发生发展,Ezrin表达增强,致使肿瘤细胞运动能力增强,说明Ezrin与乳腺导管癌的浸润和转移密切相关,可以作为预测浸润性乳腺导管癌淋巴结转移的肿瘤标志物。
[参考文献]
[1] Yu Y,Khan J,Khanna C,et al. Expression profiling identifies the cytoskeletal organizer ezrin and the developmental homeoprotein Six-1 as key metastatic regulators[J]. Nat Med,2004,10(2):175-256.
[2] Khanna C,Wan X,Bose S,et al. The membrane-cytoskeleton linker ezrin is necessary for osteosarcoma metastasis[J]. Nat Med, 2004, 10(2):182-188.
[3] Nestl A,Von Stein OD,Zatloukal K,et al. Gene expression patterns associated with the metastatic phenotype in rodent and human tumors[J]. Cancer Res,2001,61(4):1569-1577.
[4] Hunt KW, Ezrin. A key component in tumor metastasis[J]. Trends Mol Med,2004,10(5):201-205.
[5] Curto M,Mc Clatchey AI. Ezrin. a metastatic detERMinant?[J]. Cancer Cell,2004,5(2):113-117.
[6] Mathew J, Hines JE, Obafunwa JO, et al. CD44 is expressed in hepatocellular carcinomas showing vascular invasion[J]. J Pathol,1996, 179(1):74-83.
[7] Gonzalea MA,Pinder SE,Wencyk PM,et al. An immunohistochemical examination of the expression of E-cadherin,αand β/γ-catenins,and α2 and β1 integrins in invasive breast cancer[J]. J Pathol,1999, 187(5):523-529.
[8] Martin TA,Harrison G,Mansel RE,et al. The role of the CD44 /ezrin complex in cancer metastasis[J]. Crit Rev Oncol Hematol,2003,46(2):165-186.
[9] McClatchey AI. Merlin and ERM proteins:unappreciated roles in cancer development?[J]. Cancer,2003,3(11):877-884.
[10] Bretscher A,Edwards K,Fehon RG,et al. ERM proteins and merlin:integrators at the cell cortex[J]. Nature Rev Mol Cell Biol,2002, 3(8):586-599.
(收稿日期:2009-02-25)
[关键词] Ezrin;乳腺肿瘤;淋巴结转移;肿瘤标志物
[中图分类号] R737.9[中图分类号] A[文章编号] 1673-9701(2009)24-168-02
乳腺癌是最常见的恶性肿瘤之一,约占妇女全部癌症的1/4,多年以来,乳腺癌发病率以经济发达国家最高。但近年来,我国妇女乳腺癌的发病率逐年升高,并有发病年龄降低的趋势。膜细胞骨架蛋白Ezrin是ERM(Ezrin-radixin-moesin)家族成员之一,通过连接细胞骨架和细胞膜,对细胞黏附、形态、分化、运动等起重要调节作用。近来研究表明,Ezrin促进肿瘤转移[1,2]。Andrea 等[3]运用消减杂交技术发现,在鼠乳腺癌细胞株中Ezrin 是一个肿瘤转移基因。Ezrin 蛋白的C末端与细胞骨架的肌动蛋白相连,N 末端则可通过与细胞表面黏附分子cadherin、CD44 等连接,调节细胞-细胞及细胞-细胞外基质之间的黏附,从而影响肿瘤细胞侵袭性等生物学行为[4,5]。本研究通过免疫组化方法观察Ezrtin在乳腺浸润性导管癌组织中的表达情况,来探讨Ezrin与乳腺浸润性导管癌侵袭转移的关系。
1材料与方法
1.1材料来源
收集本院2005～2007年乳腺切除或单纯性乳腺包块的组织标本70例,其中,非典型增生5例,纤维囊性乳腺病9例和男性乳腺发育症2例作为对照,浸润性导管癌54例,其中22例伴淋巴结转移;全部病理均经组织病理学证实。
1.2方法
采用免疫组织化学(IHC)S-P法,4μm厚的连续切片,抗原修复采用高温高压法,S-P试剂及Ezrin单克隆浓缩型抗体均购置福州迈新生物技术有限公司(1∶300)稀释,每次实验均用已知阳性切片做阳性对照,用PBS代替一抗做阴性对照,DAB显色,苏木素复染,中性树胶封片,显微镜随机选取5个视野,每个视野计数1000个细胞。
1.3结果判定
Ezrin阳性反应为细胞膜及细胞浆的棕黄染色,呈均一弥漫性分布,按染色强度和阳性表达细胞数,参考Mathew等分级标准:-,无表达; ,<50%细胞阳性表达或染色较浅; ,≥50%阳性表达且深染。( )称为强阳性。
1.4统计学方法
采用统计软件SPSS10.0进行统计学分析,采用卡方检验及Speaman等级相关分析,P<0.05表明差异有显著性。
2结果
2.1Ezrin 在良性乳腺增生组织中的表达
在良性乳腺增生组织中,Ezrin主要分布在腺导管上皮和腺泡上皮细胞胞膜,呈阳性棕黄色颗粒着色(图1)。
Ezrin在乳腺浸润性导管癌中有33例异常表达(33/54, 61.11%),其中在32例无转移的癌组织中有15例异常表达(15/32,53.12%),而在22例有淋巴结转移的癌组织中16例异常表达(16/22,72.73%)。x2检验表明,Ezrin 在无转移的癌组织中的异常表达率较有转移的癌组织明显减低,二者之间差异有显著性(x2=4.261,P=0.039)。Ezrin的异常表达与乳腺癌转移淋巴结数量的多少密切相关,转移淋巴结数量越多,Ezrin 的阳性表达率越高(x2=4.234,P=0.040)。见表1。
3讨论
侵袭和转移是恶性肿瘤的主要生物学特征,是导致手术、放疗及化疗等治疗失败和患者死亡的最主要原因,也是一个极其复杂、多步骤的过程,包括癌细胞从原发部位脱落,结合并降解基底膜;癌细胞侵入血管、淋巴管;癌细胞在循环中运行和滞留;最后穿出血管、淋巴管并增殖形成转移灶。研究表明,Ezrin在肿瘤的侵袭和转移中扮演重要角色[8,9]。Ezrin是ERM蛋白家族(Ezrin,Radixin和Moesin)中研究较深入的细胞内骨架蛋白,通过其C-,N-末端分别与细胞骨架和细胞膜蛋白的结合,形成专门的膜区域结构,调节细胞活动如生存、黏附、迁移、侵袭,这些活动在肿瘤发展和进程中都是非常重要的[10]。Ezrin 可作为酪氨酸-磷酸激酶的作用底物,在跨膜信号中发挥调节信号转导和细胞对信号的反应功能。Khanna等[2]研究发现,促进细胞的生存的MAPK和Akt的活性随着Ezrin的表达减少而降低。在肿瘤进程的晚期转移中,不是Akt而是MAPK途径增加了Ezrin低表达细胞的转移优势,这说明Ezrin可能调控多条信号通路来促进肿瘤转移。另外,Yu等[1]研究发现小GTP酶Rho和Ezrin相关的转移潜能有密切联系,通过影响细胞骨架肌动蛋白和细胞形态,调控细胞的黏附和活动[9]。由此看出,Ezrin可能是多条信号通路的交叉点。
Ezrin在不同组织中表达情况不一样。研究表明,Ezrin 在前列腺癌和子宫内膜腺癌中表达高于其对应的良性病变,而在结肠癌中其表达低于正常组织[8]。本研究数据表明Ezrin在乳腺浸润性导管癌中的表达明显高于良性病变,且有淋巴结转移者比无转移者更明显,两者差异有统计学意义,这说明,Ezrin 在乳腺癌中对肿瘤发生淋巴转移有着重要的促进作用。
纤维囊性乳腺病是乳腺癌的癌前病变,而合并导管上皮非典型增生的纤维囊性乳腺病更是乳腺癌的前驱病变,本研究数据表明Ezrin在乳腺癌中的表达明显高于良性病变,这就提示Ezrin在乳腺癌发生的前期可能发挥了一定的作用。通过进一步的分析乳腺癌组织Ezrin高表达的临床意义发现Ezrin的表达与患者的年龄、肿瘤组织学类型等无关,而与淋巴结转移与否有关,在有淋巴结转移者Ezrin表达最高,这进一步说明Ezrin对肿瘤的发生淋巴结转移有着重要的促进作用。这与Yu等和Khanna等的研究Ezrin蛋白与肿瘤的转移能力高度相关的结果相一致。
很多实验证明肿瘤的转移与细胞表面分子(CD44、Met)关系密切,而Ezrin蛋白可以和他们发生作用,可能参与到肿瘤转移的过程中,在对神经系统肿瘤、结肠癌等研究中发现Ezrin蛋白可直接或间接与细胞表面黏附分子E-cadherin和CD44等结合而调节瘤细胞的黏附性,影响肿瘤的侵袭性和转移。近年来,在对前列腺癌、食管癌、胰腺癌、卵巢癌和横纹肌肉瘤等的研究发现,在几种癌症类型中的高表达,都提示Ezrin与这些恶性肿瘤的发生、发展以及转移有关。我们观察到,Ezrin在浸润性乳腺导管癌组织中高表达,在有淋巴结转移的原发癌灶中这种异常表达更明显,有局部淋巴结转移者的异常表达率明显高于无局部淋巴结转移者,两者之间差异呈显著的正相关。一方面,在机体正常情况下,Ezrin发挥正常作用维持细胞形态;另一方面,随着肿瘤发生发展,Ezrin表达增强,致使肿瘤细胞运动能力增强,说明Ezrin与乳腺导管癌的浸润和转移密切相关,可以作为预测浸润性乳腺导管癌淋巴结转移的肿瘤标志物。
[参考文献]
[1] Yu Y,Khan J,Khanna C,et al. Expression profiling identifies the cytoskeletal organizer ezrin and the developmental homeoprotein Six-1 as key metastatic regulators[J]. Nat Med,2004,10(2):175-256.
[2] Khanna C,Wan X,Bose S,et al. The membrane-cytoskeleton linker ezrin is necessary for osteosarcoma metastasis[J]. Nat Med, 2004, 10(2):182-188.
[3] Nestl A,Von Stein OD,Zatloukal K,et al. Gene expression patterns associated with the metastatic phenotype in rodent and human tumors[J]. Cancer Res,2001,61(4):1569-1577.
[4] Hunt KW, Ezrin. A key component in tumor metastasis[J]. Trends Mol Med,2004,10(5):201-205.
[5] Curto M,Mc Clatchey AI. Ezrin. a metastatic detERMinant?[J]. Cancer Cell,2004,5(2):113-117.
[6] Mathew J, Hines JE, Obafunwa JO, et al. CD44 is expressed in hepatocellular carcinomas showing vascular invasion[J]. J Pathol,1996, 179(1):74-83.
[7] Gonzalea MA,Pinder SE,Wencyk PM,et al. An immunohistochemical examination of the expression of E-cadherin,αand β/γ-catenins,and α2 and β1 integrins in invasive breast cancer[J]. J Pathol,1999, 187(5):523-529.
[8] Martin TA,Harrison G,Mansel RE,et al. The role of the CD44 /ezrin complex in cancer metastasis[J]. Crit Rev Oncol Hematol,2003,46(2):165-186.
[9] McClatchey AI. Merlin and ERM proteins:unappreciated roles in cancer development?[J]. Cancer,2003,3(11):877-884.
[10] Bretscher A,Edwards K,Fehon RG,et al. ERM proteins and merlin:integrators at the cell cortex[J]. Nature Rev Mol Cell Biol,2002, 3(8):586-599.
(收稿日期:2009-02-25)