【摘 要】
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目的 获得带FLAG标签的结核分枝杆菌PE35的真核表达载体,并在293T细胞中检测其表达.方法 用PCR方法从质粒上获得PE35基因全长,克隆到pCDNA3-FLAG真核表达载体上；用脂质体介导
【机 构】
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解放军第三○九医院结核病研究所,北京,100091;军事医学科学院
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目的 获得带FLAG标签的结核分枝杆菌PE35的真核表达载体,并在293T细胞中检测其表达.方法 用PCR方法从质粒上获得PE35基因全长,克隆到pCDNA3-FLAG真核表达载体上；用脂质体介导的基因瞬时转染法,将构建正确的表达载体转染293T细胞；Western-blot法检测细胞中的FLAG融合蛋白的表达.结果 酶切鉴定和DNA序列分析显示构建了正确的FLAG-PE35真核表达载体,并能在真核细胞中表达相对分子量大小相符的重组蛋白.结论 成功构建了FLAG-PE35真核表达载体,并在真核细胞中得到表达.为研究PE35蛋白在结核分枝杆菌中的功能研究奠定了基础.
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