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摘 要：本实验以黄芩苷为指标对黄芩提取工艺进行优化。含量测定方法：色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）；检测波长为278nm；流速1.0mL·min-1；柱温：35℃。黄芩苷对照品在50～400μg/ml范围内线性关系良好。黄芩苷平均回收率分别为99.5%。最佳提取工艺为加入10倍量水，煎煮提取60分钟，连续提取2次。测定方法简便、准确，可用于黄芩提取膏的含量测定；本工艺稳定、可行、收率高。
关键词：黄芩；提取；工艺
黄芩为唇形科植物黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi），具有清热燥湿，凉血安胎，解毒等功效。《药性论》记载：“能治热毒，骨蒸，寒热往来，肠胃不利，破壅气，治五淋，令人宣畅，去关节烦闷，解热渴，治热腹中疞痛，心腹坚胀。”黄芩主要用于上呼吸道感染、肺炎、痢疾、咳血、肺热咳嗽、湿热黄胆、胎动不安、高血压等症的治疗。黄芩具有抗氧化、抗菌、降压、抗真菌、抗肿瘤、降血脂、抗血小板聚集、抗癌、保肝、利胆、抗炎、解热等作用[1-5]。黄芩含有黄芩苷、汉黄芩甙、黄芩黄酮（skullcapflavone）、二氢木蝴蝶素A（dihydrooroxylin A），白杨素（chrysin）、黄芩素、汉黄芩素等成分。黄芩苷为黄芩主要有效成分之一。本实验以黄芩苷为指标对黄芩提取工艺进行研究。
1 仪器与试药
UV1600紫外可见分光光度计（西安华辰乐天实验室设备有限公司）； EX1600四元低压梯度液相色谱仪（南京皓而普分析设备有限公司）； FA1204CFAC型全自動內校電子分析天平（北京同德创业科技有限公司）；美国必能信超声波清洗机（北京星越天成科技有限公司）；HH-601超级恒温水浴锅（常州市华怡仪器制造有限公司）；实验室用高纯水制备器（北京科誉兴业科技发展有限公司）。黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所提供）。乙腈（南京大唐化工有限公司）；甲醇（北京亚太龙兴化工有限公司）；乙醇（北京亚太龙兴化工有限公司）；磷酸（广州市西陇化工有限公司）。
2 方法与结果
2.1 单因素考察
2.1.1 提取次数
取黄芩原药材，除去杂质，洗净，置蒸制容器内隔水加热，蒸制半小时，取出，趁热切薄片，干燥。取炮制后黄芩片，精密称定，至于圆底烧瓶内，分别提取四次，第一次加10倍水，煎煮提取60分钟，过滤，合并滤液，减压浓缩；第二次加10倍水，煎煮提取60分钟，连续提取两次，过滤，合并滤液，减压浓缩；第三次加10倍水，煎煮提取60分钟，连续提取三次，过滤，合并滤液，减压浓缩。第四次加10倍水，煎煮提取60分鐘，连续提取四次，过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中黄芩苷含量并计算黄芩苷收率。
2.1.2 加水倍数
取黄芩原药材，除去杂质，洗净，置蒸制容器内隔水加热，蒸制半小时，取出，趁热切薄片，干燥。取炮制后黄芩片，精密称定，至于圆底烧瓶内，分别提取四次，第一次加14倍水，煎煮提取60分钟，连续四次，第二次加12倍水，煎煮提取60分钟，连续四次，第三次加10倍水，煎煮提取60分钟，连续四次，第四次加8倍水，煎煮提取60分钟，连续四次，分别过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中黄芩苷含量并计算黄芩苷收率。
2.1.3 提取时间
取黄芩原药材，除去杂质，洗净，置蒸制容器内隔水加热，蒸制半小时，取出，趁热切薄片，干燥。取炮制后黄芩片，精密称定，至于圆底烧瓶内，分别提取三次，第一次加10倍水，煎煮提取30分钟，连续四次，第二次加10倍水，煎煮提取60分钟，连续四次，第三次加10倍水，煎煮提取90分钟，连续四次，分别过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中黄芩苷含量并计算黄芩苷收率。
2.2 正交试验设计
实验结果表明，提取次数、加水倍数和提取时间对黄芩苷收率影响较大。选择提取次数、加水倍数和提取时间作为考察因素，采用正交试验法对影响提取效率的其它工艺条件进行优选。采用3个考察水平，用L9（34）正交表进行试验，因素水平表见表1。
3 含量测定
3.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果 ，确定色谱条件如下。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相为甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）；检测波长为278nm；流速1.0mL·min-1；柱温：35℃。理论板数按黄芩苷峰计算应不得低于2000。
3.2 供试品溶液的制备
取提取膏适量，精密量取，至于25毫升容量瓶内，用70%乙醇超声溶解，放置室温，用70%乙醇定容，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
3.3 对照品溶液的制备
分别精密称取黄芩苷对照品5mg，置100mL容量瓶中，用70%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
3.4 标准曲线的制备
将浓度为50μg/ml，100μg/ml，150μg/ml，200μg/ml，250μg/ml，300μg/ml，350μg/ml，400μg/ml的对照品溶液分别吸取20μL注入HPLC，以进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值A为纵坐标，绘制标准曲线。试验表明，黄芩苷对照品在50～400μg/ml范围内线性关系良好。
3.5 回收率试验
取已知含量的同一批供试品各6份，分别精密添加一定量的黄芩苷对照品，测定含量，计算回收率。平均回收率为99.5%，RSD为0.73%。
4 实验结果
按照L9（34）正交设计表条件进行试验，得到最佳提取工艺为加入10倍量水，煎煮提取60分钟，连续提取2次。本工艺稳定、可行、收率高。
参考文献
[1]唐雪阳，许舒娅，卢广英，赵丽敏，张璐，李焕娟，李钢，孙雅姝，温静，彭平，孙道涵，冯朵，杨元，石任兵.黄芩的黄酮类化学成分及其药理作用研究进展[A].中华中医药学会中药化学分会第九届学术年会论文集（第一册）[C].2014.
[2]侯华新，黎丹戎，秦箐，张玮，邱莉，吴华慧，SorenBroggerChristensen.黄芩黄酮A对人肝癌细胞7402的抑制能力及体外增效作用[J].中国临床药学杂志，2000（03）.
[3]王喆明，吴再旺，王璇，蔡少青，钱瑞琴.不同产地、生长方式黄芩的药效比较研究[A].第六届全国中西医结合基础理论研究学术研讨会暨第二届湖南省中西医结合学会肝病专业学术年会论文集[C].2010.
[4]张金玲，陈兰秀.试论中药黄芩的药理及临床应用[A].2004年全国中药研究暨中药房管理学术研讨会论文汇编[C].2004.
[5]刘玉萍，Purusotam Basnet，小松かつ子，曹晖.黄芩清除自由基活性与黄芩苷含量的相关性研究[J].中国中药杂志，2002（08）.
关键词：黄芩；提取；工艺
黄芩为唇形科植物黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi），具有清热燥湿，凉血安胎，解毒等功效。《药性论》记载：“能治热毒，骨蒸，寒热往来，肠胃不利，破壅气，治五淋，令人宣畅，去关节烦闷，解热渴，治热腹中疞痛，心腹坚胀。”黄芩主要用于上呼吸道感染、肺炎、痢疾、咳血、肺热咳嗽、湿热黄胆、胎动不安、高血压等症的治疗。黄芩具有抗氧化、抗菌、降压、抗真菌、抗肿瘤、降血脂、抗血小板聚集、抗癌、保肝、利胆、抗炎、解热等作用[1-5]。黄芩含有黄芩苷、汉黄芩甙、黄芩黄酮（skullcapflavone）、二氢木蝴蝶素A（dihydrooroxylin A），白杨素（chrysin）、黄芩素、汉黄芩素等成分。黄芩苷为黄芩主要有效成分之一。本实验以黄芩苷为指标对黄芩提取工艺进行研究。
1 仪器与试药
UV1600紫外可见分光光度计（西安华辰乐天实验室设备有限公司）； EX1600四元低压梯度液相色谱仪（南京皓而普分析设备有限公司）； FA1204CFAC型全自動內校電子分析天平（北京同德创业科技有限公司）；美国必能信超声波清洗机（北京星越天成科技有限公司）；HH-601超级恒温水浴锅（常州市华怡仪器制造有限公司）；实验室用高纯水制备器（北京科誉兴业科技发展有限公司）。黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所提供）。乙腈（南京大唐化工有限公司）；甲醇（北京亚太龙兴化工有限公司）；乙醇（北京亚太龙兴化工有限公司）；磷酸（广州市西陇化工有限公司）。
2 方法与结果
2.1 单因素考察
2.1.1 提取次数
取黄芩原药材，除去杂质，洗净，置蒸制容器内隔水加热，蒸制半小时，取出，趁热切薄片，干燥。取炮制后黄芩片，精密称定，至于圆底烧瓶内，分别提取四次，第一次加10倍水，煎煮提取60分钟，过滤，合并滤液，减压浓缩；第二次加10倍水，煎煮提取60分钟，连续提取两次，过滤，合并滤液，减压浓缩；第三次加10倍水，煎煮提取60分钟，连续提取三次，过滤，合并滤液，减压浓缩。第四次加10倍水，煎煮提取60分鐘，连续提取四次，过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中黄芩苷含量并计算黄芩苷收率。
2.1.2 加水倍数
取黄芩原药材，除去杂质，洗净，置蒸制容器内隔水加热，蒸制半小时，取出，趁热切薄片，干燥。取炮制后黄芩片，精密称定，至于圆底烧瓶内，分别提取四次，第一次加14倍水，煎煮提取60分钟，连续四次，第二次加12倍水，煎煮提取60分钟，连续四次，第三次加10倍水，煎煮提取60分钟，连续四次，第四次加8倍水，煎煮提取60分钟，连续四次，分别过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中黄芩苷含量并计算黄芩苷收率。
2.1.3 提取时间
取黄芩原药材，除去杂质，洗净，置蒸制容器内隔水加热，蒸制半小时，取出，趁热切薄片，干燥。取炮制后黄芩片，精密称定，至于圆底烧瓶内，分别提取三次，第一次加10倍水，煎煮提取30分钟，连续四次，第二次加10倍水，煎煮提取60分钟，连续四次，第三次加10倍水，煎煮提取90分钟，连续四次，分别过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中黄芩苷含量并计算黄芩苷收率。
2.2 正交试验设计
实验结果表明，提取次数、加水倍数和提取时间对黄芩苷收率影响较大。选择提取次数、加水倍数和提取时间作为考察因素，采用正交试验法对影响提取效率的其它工艺条件进行优选。采用3个考察水平，用L9（34）正交表进行试验，因素水平表见表1。
3 含量测定
3.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果 ，确定色谱条件如下。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相为甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）；检测波长为278nm；流速1.0mL·min-1；柱温：35℃。理论板数按黄芩苷峰计算应不得低于2000。
3.2 供试品溶液的制备
取提取膏适量，精密量取，至于25毫升容量瓶内，用70%乙醇超声溶解，放置室温，用70%乙醇定容，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
3.3 对照品溶液的制备
分别精密称取黄芩苷对照品5mg，置100mL容量瓶中，用70%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
3.4 标准曲线的制备
将浓度为50μg/ml，100μg/ml，150μg/ml，200μg/ml，250μg/ml，300μg/ml，350μg/ml，400μg/ml的对照品溶液分别吸取20μL注入HPLC，以进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值A为纵坐标，绘制标准曲线。试验表明，黄芩苷对照品在50～400μg/ml范围内线性关系良好。
3.5 回收率试验
取已知含量的同一批供试品各6份，分别精密添加一定量的黄芩苷对照品，测定含量，计算回收率。平均回收率为99.5%，RSD为0.73%。
4 实验结果
按照L9（34）正交设计表条件进行试验，得到最佳提取工艺为加入10倍量水，煎煮提取60分钟，连续提取2次。本工艺稳定、可行、收率高。
参考文献
[1]唐雪阳，许舒娅，卢广英，赵丽敏，张璐，李焕娟，李钢，孙雅姝，温静，彭平，孙道涵，冯朵，杨元，石任兵.黄芩的黄酮类化学成分及其药理作用研究进展[A].中华中医药学会中药化学分会第九届学术年会论文集（第一册）[C].2014.
[2]侯华新，黎丹戎，秦箐，张玮，邱莉，吴华慧，SorenBroggerChristensen.黄芩黄酮A对人肝癌细胞7402的抑制能力及体外增效作用[J].中国临床药学杂志，2000（03）.
[3]王喆明，吴再旺，王璇，蔡少青，钱瑞琴.不同产地、生长方式黄芩的药效比较研究[A].第六届全国中西医结合基础理论研究学术研讨会暨第二届湖南省中西医结合学会肝病专业学术年会论文集[C].2010.
[4]张金玲，陈兰秀.试论中药黄芩的药理及临床应用[A].2004年全国中药研究暨中药房管理学术研讨会论文汇编[C].2004.
[5]刘玉萍，Purusotam Basnet，小松かつ子，曹晖.黄芩清除自由基活性与黄芩苷含量的相关性研究[J].中国中药杂志，2002（08）.