论文部分内容阅读
目的 构建中国分离株多房棘球绦虫原头节cDNA表达文库。方法 mRNA的提取采用Quicprep MicromRNA purification kit并做适当改进,主要利用异硫氰酸胍的破坏和保护双重作用及oligo(dT)-纤维素柱层析来提取、纯化mRNA。以约1.8 μg的mRNA为模板、六聚体随机引物逆转录,再用衔接头EcoRI/NotI修饰逆转录所得的cDNA钝端以使其两端形成粘性EcoRI位点,然后克隆入噬菌体λgtll的EcoRI臂,体外包装后转染大肠杆菌Y1090,蓝白斑筛选重组体,PCR鉴定插入片段大小。结果 重组率几乎100%;库容量约1×106,插入片段长为1.47 Kb。结论 已成功构建中国分离株多房棘球绦虫原头节cDNA表达文库,可进行进一步的深入研究。