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根据丙型肝炎病毒（HCV）丝氨酸蛋白酶晶体结构特点，设计并构建了一种新的单链型丝氨酸蛋白酶分子。该分子由辅因子NS4A的核心序列、柔性连接子GSGS和NS3丝氨酸蛋白酶结构域组成。利用设计的3条引物，通过2轮PCR获得单链丝氨酸蛋白酶基因，插入原核表达载体pQE30中，转化大肠杆菌M15，获得重组克隆。经低剂量诱导和低温培养，目的基因获得高水平可溶表达。以金属螯合层析法纯化的重组蛋白纯度达95％以上。间接ELISA法检测98份血清证实，该蛋白具有良好的抗原性和特异性；以重组蛋白底物NS5ab和单链丝氨酸蛋