【摘 要】
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目的:研究Notch4信号通路对口腔鳞癌PJ15和PJ41细胞的肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)自我更新能力的影响及其作用机制.方法:利用TCGA数据库分析Notch4基因在头颈部肿瘤中
【机 构】
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上海中医药大学研究生院,上海,201203上海健康医学院医学技术学院生物化学教研室,上海201318;上海中医药大学,上海201203;
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目的:研究Notch4信号通路对口腔鳞癌PJ15和PJ41细胞的肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)自我更新能力的影响及其作用机制.方法:利用TCGA数据库分析Notch4基因在头颈部肿瘤中的表达.2μmol/L顺铂处理口腔鳞癌PJ15和PJ41细胞48 h,再加入Notch通路抑制剂DAPT作用24h,采用流式细胞术检测CSC比例,Western blotting法和qPCR法检测CSC标志物(Sox2、Bmi-1、Oct4、Nanog)和Notch4信号通路中的下游基因(JAG1、HEY1、HEY2、HES1、HES2、DLL4等)的表达.采用siRNA技术敲降Notch4,Western blotting法和qPCR法检测si-Notch4和顺铂对CSC标志物表达水平的影响,干细胞成球实验检测CSC的自我更新能力.结果:头颈部肿瘤组织中Notch4基因呈高表达(P=0.046).顺铂处理后,PJ15和PJ41细胞中NICD4和CSC标志物(Sox2、Bmi-1、Oct4、Nanog)和Notch4信号通路的下游基因(JAG1、HEY1、HEY2、HES1、HES2、DLL4)的表达水平较对照组均显著增加(均P＜0.05),ALDH1阳性细胞群体比例显著增加(P＜0.05);再加入Notch通路抑制剂DAPT作用24 h后上述基因表达量均显著下降(P＜0.05或P＜0.01).敲降Notch4后,与对照组相比,si-Notch4组PJ15细胞[(1.33±0.47)vs(8.00±0.82)个,P＜0.01]和PJ41细胞[(1.00±0.82)vs(7.67±1.25)个,P＜0.01]球体的数量和大小均显著减少;再加入2μmol/L DDP作用24h,si-Notch4组Nanog和Bmi-1基因表达量与对照组无显著差异.结论:激活Notch4信号通路可增加口腔鳞癌PJ15和PJ41细胞的干细胞自我更新能力.
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