【摘 要】
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目的:基于G蛋白耦联受体147(GPR147)受体探讨促性腺激素抑制激素(gonadotropin inhibitory hormone,GnIH)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡和PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响及分子机制.方法:①体外培养人乳腺癌细胞系MCF-7,设空白调零组、对照组和GnIH实验组(0.1ng/mL、1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL、1000ng/mL、10000ng/mL).应用CCK-8法检测细胞增殖能力;用流式细胞仪检测凋亡率;通过实时荧光定量PCR(q
【机 构】
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承德医学院,河北 承德 067000;承德医学院附属医院, 河北 承德 067000
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目的:基于G蛋白耦联受体147(GPR147)受体探讨促性腺激素抑制激素(gonadotropin inhibitory hormone,GnIH)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡和PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响及分子机制.方法:①体外培养人乳腺癌细胞系MCF-7,设空白调零组、对照组和GnIH实验组(0.1ng/mL、1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL、1000ng/mL、10000ng/mL).应用CCK-8法检测细胞增殖能力;用流式细胞仪检测凋亡率;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印记分析(Western Blot),在mRNA和蛋白质水平上检测GnIH对凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、cytochrome C、Caspase-3、P53)和PI3K/AKT/mTOR信号通路上PI3K、AKT/p-AKT、mTOR蛋白表达情况.Western Blot法检测GnIH的受体GPR147在MCF-7细胞系上的表达情况.②将细胞分为PBS对照组、DMSO对照组、GnIH组和GnIH+RF9抑制剂组培养24h,分别加入PBS15μL、DMSO3μL、GnIH10000ng/mL和GnIH10000ng/mL+RF910μmoL进行干预,继续培养24h.Western Blot检测AKT/p-AKT蛋白表达情况.结果:①CCK-8结果显示:GnIH实验组0.1ng/mL、1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL、1000ng/mL的细胞与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);GnIH10000ng/mL实验组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05).流式细胞仪检测结果:对照组和GnIH实验组10000ng/mL时的细胞凋亡率分别为(7.76±1.57)％和(16.14±3.001)％,差异有统计学意义(F=6.164,P=0.0351).凋亡相关蛋白Bax、cytochrome C、Caspase-3蛋白表达(P<0.01)和P53蛋白表达显著上调(P<0.05),Bcl-2蛋白表达显著下调(P<0.01).PI3K/AKT/mTOR信号通路中,PI3K、AKT/pAKT、mTOR蛋白表达显著下调(P<0.05).MCF-7细胞系上存在GnIH的受体GRP147,当药物浓度为10000ng/mL时,与对照组比较受体激活(P<0.01).抑制剂干预后,与GnIH组相比,GnIH+抑制剂RF9组细胞的AKT/p-AKT蛋白表达水平显著升高(P<0.05).结论:乳腺癌细胞系MCF-7上存在GnIH受体GPR147.GnIH可能通过与GPR147受体结合抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖和诱导凋亡,并且凋亡的发生可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关.
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