【摘 要】
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目的 探讨circMAN2B2对宫颈癌细胞顺铂敏感性的影响及分子机制.方法 采用顺铂梯度暴露法构建顺铂耐药宫颈癌细胞株HeLa/DDP,将其分为DDP+si-NC组、DDP+si-circMAN2B2组、DDP+si-circMAN2B2+anti-miR-NC组、DDP+si-circMAN2B2+anti-miR-216a-3p组.四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖抑制率及半数抑制浓度(IC50);实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测circMAN2B2和miR-216a-3p的表达水平;
【机 构】
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570208 海口市,中南大学湘雅医学院附属海口医院妇产科;570208 海口市,中南大学湘雅医学院附属海口医院放射科
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目的 探讨circMAN2B2对宫颈癌细胞顺铂敏感性的影响及分子机制.方法 采用顺铂梯度暴露法构建顺铂耐药宫颈癌细胞株HeLa/DDP,将其分为DDP+si-NC组、DDP+si-circMAN2B2组、DDP+si-circMAN2B2+anti-miR-NC组、DDP+si-circMAN2B2+anti-miR-216a-3p组.四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖抑制率及半数抑制浓度(IC50);实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测circMAN2B2和miR-216a-3p的表达水平;双荧光素酶报告实验检测circMAN2B2和miR-216a-3p的靶向调控;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达.结果 与HeLa细胞比较,HeLa/DDP细胞增殖抑制率显著降低,IC50值升高,circMAN2B2表达水平升高,miR-216a-3p表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05).StarBase预测显示,circMAN2B2的序列中含有与miR-216a-3p互补的核苷酸序列.WT-circMAN2B2与miR-216a-3p共转染的细胞荧光素酶活性低于WT-circMAN2B2与miR-NC组共转染的细胞(P<0.05),而MUT-circMAN2B2与miR-216a-3p或miR-NC共转染的细胞荧光素酶活性比较差异无统计学意义.过表达circMAN2B2,miR-216a-3p表达水平降低(P<0.05),抑制circMAN2B2表达后miR-216a-3p表达水平升高(P<0.05).与DDP+si-NC组比较,DDP+si-circMAN2B2组circMAN2B2表达水平降低,miR-216a-3p表达水平升高,细胞增殖抑制率升高,细胞凋亡率升高,Ki-67、Bcl-2表达水平降低,Bax表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05).与DDP+si-circMAN2B2+anti-miR-NC组比较,DDP+si-circMAN2B2+anti-miR-216a-3p组miR-216a-3p表达水平降低,细胞增殖抑制率降低,细胞凋亡率降低,Ki-67、Bcl-2表达水平升高,Bax表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 抑制circMAN2B2表达可能通过上调miR-216a-3p增强宫颈癌细胞对顺铂的敏感性.
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