探讨核因子-κB(NF-κB)抑制剂四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对胶质瘤干细胞(GSLC)放疗增敏的作用和机制。
方法用无血清悬浮培养方法培养胶质瘤干细胞U87-sph，并用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)测定干细胞标志物的表达。用Western blot比较放疗后不同时间点U87与U87-sph中NF-κB及p-NF-κB表达。用膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙锭(PI)双染方法检测单独PDTC、单独放疗、PDTC联合放疗等不同分组的U87和U87-sph的凋亡率。采用Western blot检测U87-sph在PDTC联合放疗时凋亡相关蛋白及NF-κB通路蛋白的表达。
结果RT-PCR检测U87-sph中干细胞标志物的表达较其亲本细胞株增加。Western blot结果显示X射线照射后不同时间点，U87-sph中p-NF-κB/p65表达明显增加(P＝0.001)，且呈时间依赖性。而在U87细胞中变化不明显(P＝0.059)。U87-sph的单独PDTC处理组，单独放疗组和PDTC联合放疗组的凋亡率与对照组比较依次增加(1.10±0.07)倍(P＝0.651)、(1.49±0.12)倍(P＝0.009)、(3.20±0.19)倍(P＝0.005)。PDTC联合放疗组的凋亡率与单独PDTC组、单独放疗组比较均明显增加(P＝0.003，P＝0.004)。Western blot结果显示U87-sph的PDTC联合放疗组中剪切型半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-8与剪切型Caspase-3表达均明显增加；U87-sph在单独PDTC作用时，p-NF-κB、p-抑制因子κB(p-IκB)表达均降低，单独放疗时，两者均增强，而在PDTC联合放疗时，两者表达是降低的；U87-sph中细胞FLICE抑制蛋白(cFLIP)的表达趋势与p-NF-κB相同。
结论放疗后GSLC中NF-κB通路明显激活。PDTC可以通过抑制放疗后GSLC中NF-κB通路的激活从而诱导GSLC凋亡。