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摘 要：本文采用高效液相色谱法（HPLC-VWD）对阿司匹林肠溶片中成分阿司匹林进行测定，对方法的系统适用性试验、特异性试验、精密度试验、检测限、定量限、线性关系和线性范围考察、重复性试验、准确度试验（加样回收试验）进行验证，证实本方法确实可靠。本方法可测定浓度在0.999862mg/mL-0.01999724 mg/mL间的阿司匹林，检测下限可达0.1ug/mL。
关键词：阿司匹林;HPLC-VWD;方法验证
阿司匹林肠溶片的质量标准中，监测阿司匹林肠溶片中的阿司匹林含量是一项重要指标[1]。本文采用高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶片中的阿司匹林，分别对系统适用性试验、特异性试验、精密度试验、检测限、定量限、线性关系和线性范围考察、重复性试验、准确度试验（加样回收试验）进行验证[2]。
一、仪器与材料
1.1 样品 阿司匹林肠溶片（25mg）市售样品。
1.2 仪器及试药
高效液相色谱仪：Thermo Fisher Ultimate 3000（VWD检测器）。超声仪：上海科导SK7210LHC超声仪，35KHz。色谱柱：Welch Xtimate C18（5um，150×4.6mm）。
0.45um有机性样品滤膜。天平：赛多利斯电子天平（BSA224S-CW）（100g，0.01mg;220g，0.1g）;梅特勒-托利多电子天平（MX5）（3g，0.001mg）。
试剂：甲醇，色谱级，德国默克，I866432 601。乙腈：色谱纯，德国默克，JA050820。四氢呋喃，色谱纯，德国默克，I826801615。冰醋酸，分析纯，国药集团化学试剂有限公司，20140326。水，为GB/T6682中规定的一级水。阿司匹林，中国食品药品检定研究院，批号：100113-201405，纯度：99.8%。水杨酸，中国食品药品检定研究院，批号：100106-201104，纯度：99.9%。
1.3标准储备液的制备 取阿司匹林和水杨酸，用1%冰醋酸甲醇配制成含阿司匹林0.1mg/mL，水杨酸0.01mg/mL溶液作为系统适应性测试溶液。取阿司匹林约2.5mg，准确称定后，用1%冰醋酸甲醇溶解并定容至25mL，此溶液阿司匹林含量为0.1mg/mL，作为含量测定项下的对照品溶液。
1.4供试品制备 取本品细粉85mg（约相当于阿司匹林0.1g），精密称定，置100ml量瓶中，加1%冰醋酸的甲醇溶液振摇使阿司匹林溶解，并稀释至刻度，摇匀，滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
1.5 测定法 以乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水（20：5：5：70）为流动相;检测波长为303nm，柱温30℃。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10uL，注入色谱仪，测定，按外标法以峰面积计算，既得。
二、验证项目
2.1系统适用性试验 照高效液相色谱法测定，阿司匹林与水杨酸的分离度为13.56，满足系统分离度R>2.0的要求。
2.2特异性试验 制备正常样品与空白样品，按照供试品溶液制备方法处理，进样检测分析，考察试验样品中除阿司匹林和水杨酸以外的其他组分对阿司匹林和水杨酸的测定没有干扰。
2.3精密度试验 分别精密吸取阿司匹林对照品溶液10uL，按测定方法重复进样6次，测定峰面积值，分别为438.561、438.704、438.956、429.862、438.955、438.720，其相对标准偏差值为0.84%。
2.4线性关系与线性范围考察 分别不同浓度梯度的阿司匹林标准工作溶液，取10uL注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。配置阿司匹林的浓度分别为0.999862mg/mL、0.1999724 mg/mL、0.0999862 mg/mL、0.07998896 mg/mL、0.05999172 mg/mL、0.03999448 mg/mL、0.01999724 mg/mL。以峰面积为纵坐标，以阿司匹林浓度为横坐标作线性回归，绘制标准曲线。线性方程为Y=3916.2x+3.8453，R为0.9998。
2.5检测限定量限的确定 取一定浓度的对照品溶液，精密量取10uL注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，满足信噪比3：1或10：1为最低检测限或定量限的要求。测试得到其检出限为0.1ug/mL，定量限为0.3ug/mL。
2.6重复性试验 照1.4供试品制备方法平行制备6份样品，进行重复性试验，平均含量为0.26mg/mg，RSD为0.61%。
2.7加标回收率试验（准确度试验）制备样品进行3水平3平行加标试验，回收率分别为100.24%、101.34%、101.78%、100.85%、100.57%、100.83%、101.48%、101.98%、100.23%，平均值为101.03%，RSD为0.61%。
三、结论
通过HPLC-VWD进行测定，对阿司匹林肠溶片阿司匹林含量进行系统适用性试验、特异性试验、精密度试验、线性关系与线性范围考察、检测限、定量限、重复性试验、准确度试验（加样回收试验），各项试验测试结果均能滿足要求，仪器性能稳定，质控结果满意。从以上数据可以看出用该方法检测阿司匹林肠溶片中阿司匹林的含量结果准确可靠，可以在实验室运用。
参考文献
[1]中国医药科技出版社，《中华人民共和国药典》[M]2015年版 二部
[2]中国医药科技出版社，《中华人民共和国药典》[M]2015年版 四部
关键词：阿司匹林;HPLC-VWD;方法验证
阿司匹林肠溶片的质量标准中，监测阿司匹林肠溶片中的阿司匹林含量是一项重要指标[1]。本文采用高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶片中的阿司匹林，分别对系统适用性试验、特异性试验、精密度试验、检测限、定量限、线性关系和线性范围考察、重复性试验、准确度试验（加样回收试验）进行验证[2]。
一、仪器与材料
1.1 样品 阿司匹林肠溶片（25mg）市售样品。
1.2 仪器及试药
高效液相色谱仪：Thermo Fisher Ultimate 3000（VWD检测器）。超声仪：上海科导SK7210LHC超声仪，35KHz。色谱柱：Welch Xtimate C18（5um，150×4.6mm）。
0.45um有机性样品滤膜。天平：赛多利斯电子天平（BSA224S-CW）（100g，0.01mg;220g，0.1g）;梅特勒-托利多电子天平（MX5）（3g，0.001mg）。
试剂：甲醇，色谱级，德国默克，I866432 601。乙腈：色谱纯，德国默克，JA050820。四氢呋喃，色谱纯，德国默克，I826801615。冰醋酸，分析纯，国药集团化学试剂有限公司，20140326。水，为GB/T6682中规定的一级水。阿司匹林，中国食品药品检定研究院，批号：100113-201405，纯度：99.8%。水杨酸，中国食品药品检定研究院，批号：100106-201104，纯度：99.9%。
1.3标准储备液的制备 取阿司匹林和水杨酸，用1%冰醋酸甲醇配制成含阿司匹林0.1mg/mL，水杨酸0.01mg/mL溶液作为系统适应性测试溶液。取阿司匹林约2.5mg，准确称定后，用1%冰醋酸甲醇溶解并定容至25mL，此溶液阿司匹林含量为0.1mg/mL，作为含量测定项下的对照品溶液。
1.4供试品制备 取本品细粉85mg（约相当于阿司匹林0.1g），精密称定，置100ml量瓶中，加1%冰醋酸的甲醇溶液振摇使阿司匹林溶解，并稀释至刻度，摇匀，滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
1.5 测定法 以乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水（20：5：5：70）为流动相;检测波长为303nm，柱温30℃。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10uL，注入色谱仪，测定，按外标法以峰面积计算，既得。
二、验证项目
2.1系统适用性试验 照高效液相色谱法测定，阿司匹林与水杨酸的分离度为13.56，满足系统分离度R>2.0的要求。
2.2特异性试验 制备正常样品与空白样品，按照供试品溶液制备方法处理，进样检测分析，考察试验样品中除阿司匹林和水杨酸以外的其他组分对阿司匹林和水杨酸的测定没有干扰。
2.3精密度试验 分别精密吸取阿司匹林对照品溶液10uL，按测定方法重复进样6次，测定峰面积值，分别为438.561、438.704、438.956、429.862、438.955、438.720，其相对标准偏差值为0.84%。
2.4线性关系与线性范围考察 分别不同浓度梯度的阿司匹林标准工作溶液，取10uL注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。配置阿司匹林的浓度分别为0.999862mg/mL、0.1999724 mg/mL、0.0999862 mg/mL、0.07998896 mg/mL、0.05999172 mg/mL、0.03999448 mg/mL、0.01999724 mg/mL。以峰面积为纵坐标，以阿司匹林浓度为横坐标作线性回归，绘制标准曲线。线性方程为Y=3916.2x+3.8453，R为0.9998。
2.5检测限定量限的确定 取一定浓度的对照品溶液，精密量取10uL注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，满足信噪比3：1或10：1为最低检测限或定量限的要求。测试得到其检出限为0.1ug/mL，定量限为0.3ug/mL。
2.6重复性试验 照1.4供试品制备方法平行制备6份样品，进行重复性试验，平均含量为0.26mg/mg，RSD为0.61%。
2.7加标回收率试验（准确度试验）制备样品进行3水平3平行加标试验，回收率分别为100.24%、101.34%、101.78%、100.85%、100.57%、100.83%、101.48%、101.98%、100.23%，平均值为101.03%，RSD为0.61%。
三、结论
通过HPLC-VWD进行测定，对阿司匹林肠溶片阿司匹林含量进行系统适用性试验、特异性试验、精密度试验、线性关系与线性范围考察、检测限、定量限、重复性试验、准确度试验（加样回收试验），各项试验测试结果均能滿足要求，仪器性能稳定，质控结果满意。从以上数据可以看出用该方法检测阿司匹林肠溶片中阿司匹林的含量结果准确可靠，可以在实验室运用。
参考文献
[1]中国医药科技出版社，《中华人民共和国药典》[M]2015年版 二部
[2]中国医药科技出版社，《中华人民共和国药典》[M]2015年版 四部