【摘 要】
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目的以噬菌体展示具有天然结构的人CD28分子胞外区同二聚体,检测其抗原性和生物活性,为CD28拮抗性类肽的筛选奠定基础.方法 RT-PCR从Jurkat细胞扩增CD28胞外区,将其克隆入噬
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目的以噬菌体展示具有天然结构的人CD28分子胞外区同二聚体,检测其抗原性和生物活性,为CD28拮抗性类肽的筛选奠定基础.方法 RT-PCR从Jurkat细胞扩增CD28胞外区,将其克隆入噬菌粒载体pComb3HSS,构建的重组载体电转入受体菌XL1-blue,并加辅助噬菌体VCSM13,使CD28胞外区展示在噬菌体表面.以ELISA、流式细胞仪检测噬菌体展示CD28的抗原性和与B7-1的结合力.MTT法检测噬菌体展示CD28的生物活性.结果成功构建表达人CD28分子胞外区同二聚体的重组噬菌粒载体pComb3H-CD28,并以噬菌体展示系统展示CD28分子.ELISA和FCM结果显示,噬菌体展示CD28可与抗CD28抗体特异性结合,也可与Jurkat细胞表面CD28竞争结合抗CD28抗体,具有CD28抗原性.噬菌体展示CD28可与B7-1特异性结合,也可与Raji细胞表面CD80结合,具有与配体结合能力.体外生物活性实验显示,噬菌体展示CD28可抑制抗CD28抗体刺激的人外周血淋巴细胞增殖反应.结论利用噬菌体展示系统成功展示CD28同源二聚体,噬菌体展示CD28具有抗原性及生物活性,为以CD28为靶点体外筛选CD28拮抗性类肽,从而防治移植排斥反应和自身免疫病奠定了基础.
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