一组靶向HIV膜蛋白的单克隆抗体的分离和功能鉴定

• 作 者: 胡园园 亢佳星 郝彦玲 任莉 王硕 洪坤学 邵一鸣 王铮 李丹
• 机 构: 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心 传染病预防控制国家重点实验室，北京 102206,中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心 传染病预防控制国家重点实验室，北京 102206,中国疾病预防
• 出 处: 中华实验和临床病毒学杂志
• 发表日期: 2021年35期
• 关键词: HIV-1 中和活性 表位 单克隆抗体

目的

从中国人类免疫缺陷病毒I型(human immunodeficiency virus type I, HIV-1)慢性感染者体内筛选针对膜蛋白的单克隆抗体并对其进行功能鉴定。

方法

采用单细胞特异性分选的方法从HIV-1感染者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中筛选抗原特异性单个B细胞，通过逆转录和巢式PCR获得抗体重链和轻链的可变区基因。利用免疫遗传学数据库(immunogenetics database, IMGT)分析抗体基因家系及突变率。抗体表达纯化后，采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)鉴定其结合活性和识别表位，通过假病毒中和实验检测抗体中和能力。

结果

从1例慢性HIV-1感染者样本中筛选得到7个HIV-1膜蛋白特异性抗体。抗体重链可变区基因来自IGHV1-69*09、IGHV1-08*01、IGHV1-46*01、IGHV4-34*01、IGHV4-61*01和IGHV3-43*02家系，突变率为10.76%～21.05%。轻链可变区基因来自IGKV3-20*01、IGKV1-39*01、IGKV1-NL1*01、IGKV3-15*01和IGKV1-9*01家系，突变率为6.03%～18.64%。7个抗体均可以结合gp140，其中抗体508-B1、508-C1、508-C5、508-D4和508-E5主要识别gp41区；508-D6和508-F1结合gp120区。508-D4和508-F1分别可以中和Global Panel假病毒盘中的CNE8(Tier 2)和X2278(Tier 2)，IC₅₀值分别为38.1 μg/ml和41.7 μg/ml。

结论

本研究成功筛选得到7个HIV-1膜蛋白特异性的单克隆抗体，其中5个为识别gp41区的单克隆抗体，2个为gp120结合抗体。2个抗体具备有限的中和能力。该组抗体可为HIV-1检测试剂和抗体药物研发以及艾滋病疫苗免疫原设计提供技术储备。