【摘 要】
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目的：介绍、说明和应用Ｌｅｅ氏法测米氏常数（Ｋｍ）。方法：用尿素酶与尿素反应１０秒钟，用二乙酰一肟终止反应，并测定和换算出反应体系底物浓度［Ｓｔ］与初始底物浓度［Ｓｏ］，代入Ｌｅｅ氏方程式。结果：尿素酶Ｋｍ为２．９×１０－３ｍｏｌ／Ｌ～３．１×１０－３ｍｏｌ／Ｌ，最大
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目的：介绍、说明和应用Ｌｅｅ氏法测米氏常数（Ｋｍ）。方法：用尿素酶与尿素反应１０秒钟，用二乙酰一肟终止反应，并测定和换算出反应体系底物浓度［Ｓｔ］与初始底物浓度［Ｓｏ］，代入Ｌｅｅ氏方程式。结果：尿素酶Ｋｍ为２．９×１０－３ｍｏｌ／Ｌ～３．１×１０－３ｍｏｌ／Ｌ，最大反应速度Ｖ为２．２×１０－４ｍｏｌ／Ｓ（原液）与１．２×１０－４ｍｏｌ／Ｓ（１／２稀释液）。结论：Ｌｅｅ氏法测Ｋｍ准确、简便，受底物消耗的影响小，反应进行了５０％时，相对百分误差还不到４％。
Objective: To introduce, explain and apply the Lee’s method to determine the Michaelis constant (Km). Methods: Urease was reacted with urea for 10 seconds and the reaction was terminated by diacetyloxime. The substrate concentration [St] and the initial substrate concentration [So] were measured and calculated, and substituted into Lee’s equation. Results: The urease Km was 2.9 × 10-3mol / L ~ 3.1 × 10-3mol / L, the maximum reaction velocity V was 2.2 × 10-4mol / S (stock solution) and 1.2 × 10- 4mol / S (1/2 dilution). Conclusion: Lee’s Km method is accurate and simple, and it is less affected by substrate consumption. When the reaction is performed at 50%, the relative percentage error is less than 4%.
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