【摘 要】
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为建立针对我国流行的12种蓝舌病病毒(bluetonguevirus,BTV)血清型的特异性RT-PCR检测方法,本研究根据我国流行BTV毒株Seg-2的高度保守区域,设计出12对BTV血清型特异性扩增引
【机 构】
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云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室,云南昆明650224;云南农业大学动物医学院,云南昆明650201
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为建立针对我国流行的12种蓝舌病病毒(bluetonguevirus,BTV)血清型的特异性RT-PCR检测方法,本研究根据我国流行BTV毒株Seg-2的高度保守区域,设计出12对BTV血清型特异性扩增引物,建立了RT-PCR方法,并对该RT-PCR方法的反应条件、引物特异性与灵敏性进行了优化与验证;以我国分离的162株BTV为检测对象,对其血清型进行鉴定并构建系统发生树.结果显示,建立的BTV血清型RT-PCR具有良好的特异性与灵敏度:设计的12对引物仅与对应血清型BTV核酸模板产生特异性PCR扩增,与其余血清型毒株之间无交叉扩增现象;对不同血清型BTV核酸的检测灵敏度在1.28 ×102 copies(BTV-2)至9.62×102copies(BTV-1)之间.对我国分离的BTV毒株的RT-PCR血清型鉴定与测序结果显示,162株 BTV 分属 12种血清型(BTV-1、-2、-3、-4、-5、-7、-9、-12、-15、-16、-21与-24),根据 Seg-2序列构建的系统发生树显示,我国流行BTV血清型毒株的Seg-2序列与对应血清型的BTV标准参考毒聚为一簇,分属9个基因群(A、B、C、E、F、G、H、I和J基因群).本研究建立的BTV血清型特异性RT-PCR方法为我国流行BTV的检测、诊断与分子流行病学调查提供了可靠的技术手段.
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