【摘 要】
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为建立鹿流行性出血病病毒(EHDV)可视化RT-LAMP检测方法.本研究根据EHDV内衣壳蛋白(VP7)基因保守序列设计2对特异性引物,通过反应条件优化,建立了EHDV可视化RT-LAMP检测方法.
【机 构】
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云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室,云南昆明650224
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为建立鹿流行性出血病病毒(EHDV)可视化RT-LAMP检测方法.本研究根据EHDV内衣壳蛋白(VP7)基因保守序列设计2对特异性引物,通过反应条件优化,建立了EHDV可视化RT-LAMP检测方法.本研究建立的RT-LAMP方法的最佳反应条件为62℃C 1 h;利用该方法检测口蹄疫病毒、牛病毒性腹泻病毒、蓝舌病病毒、非洲马瘟病毒和4个血清型EHDV的RNA样品,结果显示该方法能检测4个血清型EHDV RNA,与其他病毒RNA无交叉反应,特异性较强;该方法最低可检测到4.7× 10-8 ng/μL的RNA,敏感性是普通RT-PCR方法的1 000倍.应用建立的RT-LAMP和普通RT-PCR方法分别对85份牛血液样品进行检测,结果显示,二者阳性和阴性符合率分别为100％和98.8％.本研究建立的EHDV可视化RT-LAMP检测方法具有特异性强、敏感性高、快速和高通量检测的优点,为牛EHDV感染提供了快速可视化现场检测方法.
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