【摘 要】
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人尿液中蛋白含量低,在进行质谱分析时易被高丰度蛋白掩盖.因此,发展高效和高选择性的富集方法,是实现尿蛋白标记物深度覆盖的必要前提.探究不同实验方法对尿液蛋白富集和尿蛋白质组的影响尤为重要.本研究采用超滤法、硝酸纤维素膜富集法和饱和硫酸铵沉淀法,等体积各处理5例健康志愿者和膀胱癌患者10 mL尿液样本,富集尿液蛋白,SDS-PAGE分离尿蛋白,比较不同方法纯化的效率;通过质谱分析,比较不同纯化方法的肽段鉴定效果,确定针对尿液蛋白质组蛋白的最佳富集方法.相对于超滤和硝酸纤维素膜富集法,饱和硫酸铵沉淀法成功地应
【机 构】
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辽宁师范大学生命科学学院,辽宁大连 116081;辽宁师范大学七鳃鳗研究中心,辽宁大连 116081
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人尿液中蛋白含量低,在进行质谱分析时易被高丰度蛋白掩盖.因此,发展高效和高选择性的富集方法,是实现尿蛋白标记物深度覆盖的必要前提.探究不同实验方法对尿液蛋白富集和尿蛋白质组的影响尤为重要.本研究采用超滤法、硝酸纤维素膜富集法和饱和硫酸铵沉淀法,等体积各处理5例健康志愿者和膀胱癌患者10 mL尿液样本,富集尿液蛋白,SDS-PAGE分离尿蛋白,比较不同方法纯化的效率;通过质谱分析,比较不同纯化方法的肽段鉴定效果,确定针对尿液蛋白质组蛋白的最佳富集方法.相对于超滤和硝酸纤维素膜富集法,饱和硫酸铵沉淀法成功地应用于健康人尿蛋白的富集和质谱检测,在保证回收蛋白质量的前提下,可减少高丰度白蛋白的干扰,富集更多低丰度蛋白,提高了质谱鉴定的灵敏度.综土所述,饱和硫酸铵提取尿蛋白的效果较好,该方法具有大规模处理尿液、提高蛋白质组学筛选临床诊断标记物研究的应用潜力.
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