论文部分内容阅读
摘要病理教学切片的质量直接影响着病理实验教学的质量,本文简要分析病理教学切片制作的主要环节及标准化管理,以便更好的为病理教学服务。
关键词教学切片制作环节质量管理
中图分类号:G427文献标识码:A
病理学是医学教育中实践性很强的一门基础学科。豍观察常规HE切片的组织学改变是病理学研究和诊断重要的基本方法之一。在病理实验教学过程中学生通过对病理切片的显微镜下观察了解其病变特点、可能产生的临床症状及疾病的发生发展过程和机制,从而对疾病做出准确的病理诊断。所以,教学切片的制作和管理是病理学实验教学的重要组成部分,也直接影响病理学实验课的教学效果。现就教学切片制作过程中的重要环节、注意事项以及切片管理做概括介绍。
1 教学切片的制作
1.1蜡块的制作
(1)取材。教学标本一般来自医院手术切及尸体解剖组织,明确病理诊断后选取教学所需典型病例。取材时若条件许可,需带有病灶周边正常组织;若无法保证,则单独取一小块正常组织与病变部位共同包埋。这样在最终制成的切片上既有病变组织,又有正常组织,便于对比观察。取材一般厚度以0.2-0.3cm为适,含水量丰富或易脆的组织如脑、甲状腺、癌组织等可适当厚一点,而脂肪组织、平滑肌瘤等致密的或试剂不易渗入的组织应取薄一些;淋巴结应修掉两侧球冠,并尽量剔除周围的脂肪组织。在切取纤维组织、肌肉组织、胃肠时,应注意纤维及肌肉的走向,取材时尽可能按与纤维平行走向切取为佳。
(2)固定。新鲜标本应及时固定,教学标本制作H.E切片所用固定剂为4%甲醛溶液。根据标本体积大小不同调整固定时间,一般4-12小时或更长。固定组织时,应该使用足量的固定液,多比少好,一般应为组织体积的5—10倍,最少也不应少于5倍。骨组织及钙化病灶,经过固定后,必先浸入脱钙液(浓盐酸10-15ml,溶于100ml生理盐水中)脱钙,才能进行常规切片,如脱钙不全则切片易碎裂并损伤切片刀刃。
(3)脱水。组织经过取材固定后,一般经由70%,80%,90%,95%,以至无水酒精的脱水程序,各级浓度酒精内处理的最短时间分别为2-4小时即可达到脱水的要求。但因用于制作教学切片的组织体积一般较大较厚,要求保持液体的浓度以保证脱水的作用,最好是以两次95%酒精,两次100%酒精重复进行脱水,以保证组织的水分脱净。豎脱水时间应视组织种类,组织块大小,厚薄和固定剂的不同而异。
(4)透明。组织透明时间长短应根据组织的性质而异。例如脑组织和有血块的组织,应缩短在二甲苯内留置时间,而肌肉组织和胃肠组织则应稍延长,最好先投入酒精和透明剂等量混合液半小时,再入透明剂,并更换一次透明剂,待组织完全透明后进行浸蜡,一般需要半小时至1小时。透明过久则会导致组织过度硬化变脆。
(5)浸蜡。在整个浸蜡过程中,骨、皮肤和中枢神经系统等致密组织需要较长时间。含血多的组织,肌肉和纤维束在蜡内易过硬而发脆,故浸蜡时间应缩短。浸蜡可以分两级或三级进行,以排除透明剂,浸蜡时间1-4小时或更长。
(6)包埋。组织包埋时应保持平整,用组织的最大面包理,囊壁、管腔组织还要注意方位,应竖直包埋。病变区域与正常区域分开取材的组织应间隔包埋在一起,以便于对比观察。零碎组织也应包埋在一起,并使之保持在同一水平面上。
1.2 切片
切片时刀口应锋利,防止出现刀痕和皱褶现象; 厚度一般为4-6微米,切片的要求是完整、均匀、完整。较难切的部分应放上面,如皮肤的表皮,胃肠适的浆膜等,以减少组织的断裂现象。展片水温应在40℃一45℃之间,水温过高,会引起组织细胞散开,水温过低,切片皱褶无法摊平。
1.3 染色
H.E染色的关键在于深浅适度,对比鲜明,苏木素内染色时间要根据染料的新旧、切片的类型而定,一般为5- 10min。盐酸酒精分化后水洗必须充分,一般应流水冲洗10-15分钟,以防盐酸残留份致切片褪色并有促进蓝化作用。不可用碱性溶液促进蓝化,这样处理切片易褪色,无法长期保存。最后伊红复染30秒。染色理想的切片显微镜下观察应是:细胞核与细胞浆应蓝红相映,核浆对比良好,核膜及核染色质颗粒清晰可见。豏
1.4 封片
使用中性树胶湿封切片,不可干封,以免细胞收缩、龟裂或出现黑色结晶样小点。豐中性树胶稀释度应适当,以均匀充满盖玻片不产生气泡且树胶不及外溢为佳。
2 教学切片的日常保存及管理
2.1教学切片的日常保存
教学切片制作完毕应记录制作时间、制作数量、病理诊断名称,并统一编号后放入切片盒,置于切片柜中。切片柜应保持清凉干燥,避免与化学试剂同放一室。由于(下转第77页)(上接第70页)切片久置褪色,加上实验课的破损,每次使用后应及时清理,更换褪色及破损切片,并记录需继续补充的教学切片种类,及时增补。
2.2切片的教学管理
教学切片主要在平常实习课中使用,其丢失与破损大多也在课堂,因此,切片的课堂管理就显得尤为重要。笔者所在单位在上课前即向学生介绍完整的切片制作流程,告之典型标本取得的困难,增强学生爱惜切片的意识,同时加强显微镜规范操作的培训,从而有效地减少了切片的损失。
病理教学切片的使用者主要是二年级的医学生,其制作从标本从取材到封固都有十分严格的要求。每一项处理都直接影响切片质量,而教学切片的质量又直接影响到整个病理学的教学质量和水平。应把好每一关,加强学习,通过实践不断探索总结、积累经验,以更好地为教学服务。
关键词教学切片制作环节质量管理
中图分类号:G427文献标识码:A
病理学是医学教育中实践性很强的一门基础学科。豍观察常规HE切片的组织学改变是病理学研究和诊断重要的基本方法之一。在病理实验教学过程中学生通过对病理切片的显微镜下观察了解其病变特点、可能产生的临床症状及疾病的发生发展过程和机制,从而对疾病做出准确的病理诊断。所以,教学切片的制作和管理是病理学实验教学的重要组成部分,也直接影响病理学实验课的教学效果。现就教学切片制作过程中的重要环节、注意事项以及切片管理做概括介绍。
1 教学切片的制作
1.1蜡块的制作
(1)取材。教学标本一般来自医院手术切及尸体解剖组织,明确病理诊断后选取教学所需典型病例。取材时若条件许可,需带有病灶周边正常组织;若无法保证,则单独取一小块正常组织与病变部位共同包埋。这样在最终制成的切片上既有病变组织,又有正常组织,便于对比观察。取材一般厚度以0.2-0.3cm为适,含水量丰富或易脆的组织如脑、甲状腺、癌组织等可适当厚一点,而脂肪组织、平滑肌瘤等致密的或试剂不易渗入的组织应取薄一些;淋巴结应修掉两侧球冠,并尽量剔除周围的脂肪组织。在切取纤维组织、肌肉组织、胃肠时,应注意纤维及肌肉的走向,取材时尽可能按与纤维平行走向切取为佳。
(2)固定。新鲜标本应及时固定,教学标本制作H.E切片所用固定剂为4%甲醛溶液。根据标本体积大小不同调整固定时间,一般4-12小时或更长。固定组织时,应该使用足量的固定液,多比少好,一般应为组织体积的5—10倍,最少也不应少于5倍。骨组织及钙化病灶,经过固定后,必先浸入脱钙液(浓盐酸10-15ml,溶于100ml生理盐水中)脱钙,才能进行常规切片,如脱钙不全则切片易碎裂并损伤切片刀刃。
(3)脱水。组织经过取材固定后,一般经由70%,80%,90%,95%,以至无水酒精的脱水程序,各级浓度酒精内处理的最短时间分别为2-4小时即可达到脱水的要求。但因用于制作教学切片的组织体积一般较大较厚,要求保持液体的浓度以保证脱水的作用,最好是以两次95%酒精,两次100%酒精重复进行脱水,以保证组织的水分脱净。豎脱水时间应视组织种类,组织块大小,厚薄和固定剂的不同而异。
(4)透明。组织透明时间长短应根据组织的性质而异。例如脑组织和有血块的组织,应缩短在二甲苯内留置时间,而肌肉组织和胃肠组织则应稍延长,最好先投入酒精和透明剂等量混合液半小时,再入透明剂,并更换一次透明剂,待组织完全透明后进行浸蜡,一般需要半小时至1小时。透明过久则会导致组织过度硬化变脆。
(5)浸蜡。在整个浸蜡过程中,骨、皮肤和中枢神经系统等致密组织需要较长时间。含血多的组织,肌肉和纤维束在蜡内易过硬而发脆,故浸蜡时间应缩短。浸蜡可以分两级或三级进行,以排除透明剂,浸蜡时间1-4小时或更长。
(6)包埋。组织包埋时应保持平整,用组织的最大面包理,囊壁、管腔组织还要注意方位,应竖直包埋。病变区域与正常区域分开取材的组织应间隔包埋在一起,以便于对比观察。零碎组织也应包埋在一起,并使之保持在同一水平面上。
1.2 切片
切片时刀口应锋利,防止出现刀痕和皱褶现象; 厚度一般为4-6微米,切片的要求是完整、均匀、完整。较难切的部分应放上面,如皮肤的表皮,胃肠适的浆膜等,以减少组织的断裂现象。展片水温应在40℃一45℃之间,水温过高,会引起组织细胞散开,水温过低,切片皱褶无法摊平。
1.3 染色
H.E染色的关键在于深浅适度,对比鲜明,苏木素内染色时间要根据染料的新旧、切片的类型而定,一般为5- 10min。盐酸酒精分化后水洗必须充分,一般应流水冲洗10-15分钟,以防盐酸残留份致切片褪色并有促进蓝化作用。不可用碱性溶液促进蓝化,这样处理切片易褪色,无法长期保存。最后伊红复染30秒。染色理想的切片显微镜下观察应是:细胞核与细胞浆应蓝红相映,核浆对比良好,核膜及核染色质颗粒清晰可见。豏
1.4 封片
使用中性树胶湿封切片,不可干封,以免细胞收缩、龟裂或出现黑色结晶样小点。豐中性树胶稀释度应适当,以均匀充满盖玻片不产生气泡且树胶不及外溢为佳。
2 教学切片的日常保存及管理
2.1教学切片的日常保存
教学切片制作完毕应记录制作时间、制作数量、病理诊断名称,并统一编号后放入切片盒,置于切片柜中。切片柜应保持清凉干燥,避免与化学试剂同放一室。由于(下转第77页)(上接第70页)切片久置褪色,加上实验课的破损,每次使用后应及时清理,更换褪色及破损切片,并记录需继续补充的教学切片种类,及时增补。
2.2切片的教学管理
教学切片主要在平常实习课中使用,其丢失与破损大多也在课堂,因此,切片的课堂管理就显得尤为重要。笔者所在单位在上课前即向学生介绍完整的切片制作流程,告之典型标本取得的困难,增强学生爱惜切片的意识,同时加强显微镜规范操作的培训,从而有效地减少了切片的损失。
病理教学切片的使用者主要是二年级的医学生,其制作从标本从取材到封固都有十分严格的要求。每一项处理都直接影响切片质量,而教学切片的质量又直接影响到整个病理学的教学质量和水平。应把好每一关,加强学习,通过实践不断探索总结、积累经验,以更好地为教学服务。