【摘 要】
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目的初步探讨TGF-β1在卵巢癌微环境中对CD8+Treg诱导过程的作用。方法建立卵巢癌细胞系SKOV3与健康人外周血CD8+T细胞体外Transwell共培养系统,实验组为SKOV3与健康人外周血
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院检验学部国家临床检验重点专科建设单位,
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目的初步探讨TGF-β1在卵巢癌微环境中对CD8+Treg诱导过程的作用。方法建立卵巢癌细胞系SKOV3与健康人外周血CD8+T细胞体外Transwell共培养系统,实验组为SKOV3与健康人外周血CD8+T细胞共培养组,对照组为健康人外周血CD8+T细胞单独培养组,培养5 d后收集2组共培养上清。ELISA法检测2组上清中TGF-β1水平。在上述共培养体系基础上增加anti-TGF-β1中和组,即在SKOV3与健康人外周血CD8+T细胞共培养体系中加入anti-TGF-β1中和抗体,共培养5 d后收集3组CD8+T细胞。流式细胞术检测各组CD8+T细胞中Treg相关标志物(CD25、Foxp3、CD28)的表达率。将3组CD8+T细胞和na?ve CD4+T细胞按照1∶0、1∶1、1∶5、1∶10、0∶1的比例进行共培养,并在体系中加入anti-CD3及辐照的PBMCs,培养56 h后加入3H-Td R,继续培养16 h后收集细胞,液体闪烁仪检测CPM值。结果与CD8+T细胞单独培养组相比,SKOV3/CD8共培养组上清中高表达TGF-β1(P<0.01)。在共培养体系中加入anti-TGF-β1中和抗体后,与SKOV3/CD8共培养组相比,anti-TGF-β1中和组CD8+CD28-Treg、CD8+CD25+Treg和CD8+Foxp3+Treg细胞比例显著下降,但相比CD8+T细胞单独培养组仍然升高。功能抑制试验结果显示,共培养组CD8+T细胞能抑制na?ve CD4+T细胞的增殖,anti-TGF-β1中和组仅在CD8+T细胞和na?ve CD4+T细胞比例为1∶1时对na?ve CD4+T细胞增殖呈现抑制作用,而单独培养组CD8+T细胞不能抑制na?ve CD4+T细胞的增殖。结论 anti-TGF-β1可部分中和卵巢癌微环境诱导的CD8+Tregs表型及功能,TGF-β1是卵巢癌细胞生长微环境诱导CD8+Treg分化过程重要的作用因素之一。
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