稳定表达T7RNAP的BHK-21细胞系的建立

• 作 者: 李欣 杨少华 王洪梅 刘晓 武建明 高运东 王立群 仲跻峰
• 机 构: 山东省农业科学院奶牛研究中心,东北农业大学生命科学学院
• 出 处: 中国预防兽医学报
• 发表日期: 2010年6期
• 关键词: T7 RNAP BHK-21细胞 T7 RNAP BHK-21 stable cell lines reverse genetic technique
• 基金项目: 基金项目：国家转基因重大专项（2009ZX08007-006B）,山东省自然科学基金（Y2008D20）,山东农科院“杰出人才”基金,山东省农业重大应用技术创新课题,山东省科技攻关项目

为建立能稳定表达T7RNA聚合酶（T7RNAP）的BHK-21细胞系以研究RNA重组疫苗．拳研究从BL21（DE3）大肠杆菌中扩增T7RNAP基因，定向克隆于质粒pcDNA3．1（＋）中，经双酶切及测序鉴定，获得阳性重组质粒pcDNA3．1-T7RNAP用该质粒转染BHK-21细胞，经G418筛选14d后获得阳性细胞株RT-PCR和westernblot检测结果表明，连立了稳定表达T7RNAP的BHK-21细胞系，并且在不同代次的阳性细胞中能稳定表达目的基因和蛋白，该研究为RNA病毒感染性质粒在细胞内转录