【摘 要】
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目的 构建hLKB1真核表达载体,证实融合蛋白在胃癌细胞内的表达及定位.方法 提取胃正常黏膜上皮细胞GES-1的总mRNA并进行反转录.以反转录的cDNA为模板PCR扩增hLKB1全长编码基
【机 构】
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中国医科大学基础医学院病理生理教研室,辽宁沈阳,110001;中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室,辽宁沈阳,110001
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目的 构建hLKB1真核表达载体,证实融合蛋白在胃癌细胞内的表达及定位.方法 提取胃正常黏膜上皮细胞GES-1的总mRNA并进行反转录.以反转录的cDNA为模板PCR扩增hLKB1全长编码基因,克隆至pCDNA3.1/flag的真核表达载体中.将构建的重组质粒测序并转染到胃癌SGC-7901细胞中,分别利用Westernblot和激光共聚焦扫描显微技术检测其表达和在胃癌细胞中的定位.结果 hLKB1全长基因序列克隆到真核表达载体中,酶切鉴定片段为1300bp.Western blot检测到真核转染的Flag-hLKB1在胃癌SGC-7901细胞表达,条带约为50kD,免疫荧光显示蛋白广泛定位于细胞质和细胞核内.结论 成功构建了hLKB1基因真核表达载体,并验证其在胃癌细胞表达.
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