【摘 要】
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目的 乳腺癌(BC)中存在多种长链非编码RNA (lncRNA)的异常表达,并且与生存预后密切相关.本研究旨在探讨lncRNA SPATA31DSP在乳腺癌中的表达并通过吸附miR-320a影响乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力.方法 收集乳腺癌组织及癌旁组织各30例,采用Real-time PCR检测SPATA31 D5P在乳腺癌组织及乳腺癌细胞系中的表达水平.选择乳腺癌MDA-MB-231细胞转染针对SPATA31D5P siRNA干扰载体,采用CCK-8法、5-乙炔基-2\'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)
【机 构】
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深圳市南山区妇幼保健院科教科,广东深圳518054;深圳市南山区妇幼保健院检验科遗传室,广东深圳518054;南方医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,广州 510515;深圳市南山区妇幼保健
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目的 乳腺癌(BC)中存在多种长链非编码RNA (lncRNA)的异常表达,并且与生存预后密切相关.本研究旨在探讨lncRNA SPATA31DSP在乳腺癌中的表达并通过吸附miR-320a影响乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力.方法 收集乳腺癌组织及癌旁组织各30例,采用Real-time PCR检测SPATA31 D5P在乳腺癌组织及乳腺癌细胞系中的表达水平.选择乳腺癌MDA-MB-231细胞转染针对SPATA31D5P siRNA干扰载体,采用CCK-8法、5-乙炔基-2\'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法、Transwell小室实验和细胞划痕实验测定细胞增殖、侵袭和迁移能力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡的改变.采用生物信息学方法筛选可与SPATA31D5P互补结合的miRNAs,Real-time PCR及双荧光素酶报告实验验证SPATA31 D5P对miR-320a的调控作用.结果 乳腺癌组织中SPATA31D5P水平显著高于邻近正常乳腺组织,各乳腺癌细胞系中SPATA31 D5P表达都高于正常乳腺上皮细胞MCF10 A.siRNA干扰组的SPATA31D5P水平为0.288±0.052,低于空白对照组的1.114±0.096和阴性对照(NC)组的1.079±0.128(P＜0.01).与NC组和空白对照组相比,干扰组MDA-MB-231细胞的增殖活力明显下降并出现G1期阻滞,凋亡率明显增加(P＜0.01);干扰组的划痕愈合率和穿膜细胞数目分别为(14.36±1.75)％和(26±1.52)个,低于NC组的(52.25±1.87)％和(67.33±2.91)个(P＜0.01).双荧光素酶实验证实,SPATA31D5P能够直接调控miR-320a的表达及荧光素酶活性.结论 SPATA31D5P在乳腺癌中高表达,干扰其表达能有效抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与靶向调控miR-320a有关.
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