【摘 要】
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青霉素G酰化酶(PGA)具有良好的催化酰化/去酰化特性,广泛应用于半合成及β-内酰胺抗生素工业中。由于嗜柠檬酸克鲁沃尔氏菌(Kc)产生的PGA具有良好的适于工业应用的特性,因此,
【机 构】
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福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心,生命科学学院;
【基金项目】
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福建省教育厅项目(No.JB12028);福建省自然科学基金(No.2013J01124)
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青霉素G酰化酶(PGA)具有良好的催化酰化/去酰化特性,广泛应用于半合成及β-内酰胺抗生素工业中。由于嗜柠檬酸克鲁沃尔氏菌(Kc)产生的PGA具有良好的适于工业应用的特性,因此,对Kc来源的PGA在重组菌BL21(DE3)中的表达进行产酶条件优化。通过调整培养基装量、培养温度、起始pH值及诱导剂的浓度,结合对细胞生长量、蛋白表达量及酶活高低的检测,以期得到产生活性PGA的最优条件。发现起始pH值为7.0,装量30 mL,30℃培养,1.0 mmol/L IPTG诱导6 h时,菌浓为16.83,总酶活达到27 905 U/L,单位酶活1 658 U/L/OD600的最佳结果。通过分析培养条件对PGA蛋白表达量(SDS聚丙烯凝胶电泳)和酶活的影响,发现PGA前体表达后的后翻译过程是产生活性酶的关键因素,该结果将为后期研究和工业应用提供重要参考依据。
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