【摘 要】
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该文探讨了内质网应激在重楼皂苷Ⅰ(polyphyllin I,PPI)诱导人肝癌Hep G2细胞凋亡中的作用。采用CCK-8法检测不同浓度的重楼皂苷I处理Hep G2细胞6、12、24 h后细胞的增殖情况
【机 构】
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四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室,四川农业大学动物医学院动物疾病与人类健康中心四川省重点实验室,
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该文探讨了内质网应激在重楼皂苷Ⅰ(polyphyllin I,PPI)诱导人肝癌Hep G2细胞凋亡中的作用。采用CCK-8法检测不同浓度的重楼皂苷I处理Hep G2细胞6、12、24 h后细胞的增殖情况;采用Hoechst 33258染色检测细胞凋亡情况;应用q RT-PCR(Real-time quantitative PCR)检测内质网应激相关基因GRP78、ATF-6、PERK、IRE-1的m RNA水平;采用Western blot方法分析重楼皂苷I对Cleaved-caspase12、Caspase-12、Cleaved-caspase3、Bax、Bcl-2、IRE-1、XBP1、CHOP和P-JNK1蛋白质水平的影响;并用流式细胞术检测20 mmol/L内质网抑制剂4-苯基丁酸(4-phenyl butyric acid,4-PBA)对细胞凋亡率的影响。结果发现,重楼皂苷I以时间–浓度依赖的方式抑制Hep G2细胞的增殖;细胞出现典型的凋亡形态;ATF-6和PERK m RNA水平无明显变化,GRP78和IRE-1 mRNA水平较阴性对照组(0 h)均显著增加(P<0.05);重楼皂苷I通过增加Bax、减少Bcl-2蛋白质水平进而活化Caspase-3来诱导细胞凋亡。进一步研究发现,重楼皂苷I可上调内质网应激通路的IRE-1,下调P-JNK1和XBP1蛋白质水平及活化内质网应激的标志蛋白质Caspase-12,但CHOP蛋白质水平无明显变化。流式细胞术结果显示,4-PBA与2.5μmol/L重楼皂苷I联合作用组的细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。因此,内质网应激参与了重楼皂苷I诱导人肝癌Hep G2细胞的凋亡,且在该过程中对细胞起到保护作用。
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