调控Hippo信号通路促进间充质干细胞修复急性呼吸窘迫综合征肺损伤

• 作 者: 董亮 李朗 陈意喆 惠姣洁
• 机 构: 台州市中心医院（台州学院附属医院）重症医学科 318000,台州市中心医院（台州学院附属医院）重症医学科 318000,南京医科大学附属无锡人民医院重症医学科 214023,南京医科大学附属无锡人民医
• 出 处: 中华急诊医学杂志
• 发表日期: 2019年28期
• 关键词: Hippo signaling Mesenchymal stem cells Alveolar type Ⅱ epithelial cells Acute re

目的

探讨通过调控Hippo信号通路促进间充质干细胞(MSC)修复脂多糖(LPS)诱导急性呼吸窘迫综合征（ARDS）肺损伤的作用。

方法

通过慢病毒载体转染构建低表达大肿瘤抑制因子1(LATS1)基因的C57BL/6小鼠骨髓来源的MSC(mMSCs)细胞系，气道内给予2 mg/mL LPS 50 μL复制小鼠ARDS模型，SPF级C57BL/6雄性小鼠随机（随机数字法）分为4组（n=36）:正常对照组、ARDS组、ARDS+空干扰病毒转染的mMSCs (MSC-shcontrol)治疗组、ARDS+转染干扰LATS1病毒的mMSCs(MSC-shLATS1)治疗组。成模后3、7、14 d后处死小鼠并收集肺组织及支气管肺泡灌洗液(BALF)样本。近红外荧光成像、免疫荧光染色及Western blot评估mMSCs在肺组织的存留及向肺泡Ⅱ型肺泡上皮(ATⅡ)细胞的分化；测定肺组织湿质量/体质量比(LWW/BW)、BALF中总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)水平及评价mMSCs对肺水肿的改善效应；Western blot检测上皮紧密连接蛋白Occludin反映mMSCs对肺泡上皮通透性影响；ELISA检测BALF中IL-1β、IL-6及IL-10含量评估mMSCs对肺组织炎症反应的影响；肺组织行HE染色及肺损伤评分评估mMSCs对肺损伤的修复作用；肺组织行Masson染色及肺纤维化评分评估mMSCs对肺纤维化的影响。

结果

MSC-shLATS1治疗组3、7、14 d mMSCs在ARDS肺组织内存留数量(个/HP)[(26.25±4.58)、(20.49±3.86)、(13.77±3.55)]均较MSC-shcontrol治疗组[(12.13±3.75)、(9.97±2.76)、(6.89±2.10)]更多(均P<0.05)，14 d向ATⅡ细胞的分化比例[(64.12±15.29)%]也较MSC-shcontrol治疗组[(19.64±3.71)%]更高(P<0.05)；MSC-shLATS1治疗组3 d及14 d LWW/BW、BALF中TP和ALB水平[(9.85±1.51)及(6.11±0.83)mg/g、(5.12±0.87)及(3.05±0.87) (mg/mL)、(0.44±0.18)及(0.33±0.04) mg/mL]均较MSC-shcontrol治疗组[(14.88±1.74)及(8.04±1.70)mg/g、(8.08±1.72)及(5.94±1.20) (mg/mL)、(0.71±0.21)及(1.07±0.29) (mg/mL)]下降(均P<0.05)，其14 d Occludin蛋白相对表达[(0.79±0.11)]较MSC-shcontrol治疗组[(0.49±0.19)]升高(P<0.05)；MSC-shLATS1治疗组BALF中IL-1β、IL-6浓度[(60.11±8.58)、(101.74±11.55)(pg/mL)]较MSC-shcontrol治疗组[(99.26±14.32)、(145.54±13.29)(pg/mL)]更低(均P<0.05)，但IL-10浓度[(316.65±37.88)(pg/mL)]较MSC-shcontrol治疗组[(190.83±22.61)(pg/mL)]更高(P<0.05)；MSC-shLATS1治疗组3 d、14 d肺损伤评分及14 d肺纤维化评分[(7.18±1.12)、(3.33±0.49)及(0.68±0.12)]均较MSC-shcontrol治疗组[(9.72±1.45)、(5.11±0.86)及(1.47±0.18)]降低(均P<0.05)。

结论

通过低表达LATS1基因抑制Hippo信号通路能促进mMSCs对ARDS肺损伤的修复效应。