重组人骨形态发生蛋白-2对体外培养的肺动脉平滑肌细胞增殖的影响及其机制

来源 :中华实验外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Tianic
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目的 探讨重组人骨形态发生蛋白(rhBMP)-2对体外培养的肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的影响及机制.方法 将用贴块法培养的PASMC传代后分成5组,Ⅰ组:含0.1%FBS培养基培养;Ⅱ组:含10%FBS培养基正常培养;Ⅲ组:10%FBS+rhBMP-2 1μg/L;Ⅳ组:10%FBS+rhBMP-2 10μg/L;Ⅴ组:10%FBS+rhBMP-2 100μg/L.倒置相差显微镜及免疫荧光法观察并鉴定培养的PASMC;使用噻唑蓝(MTT)比色法测定PASMC增殖率;流式细胞仪分析PASMC细胞周期的变化;3H-TdR掺入实验检测DNA合成情况;RT-PCR检测细胞周期素(Cyclin)D1 mRNA的表达量;Western blot检测pSmad蛋白量及Cyclin D1蛋白表达.结果 抗SM-α-actin免疫荧光染色鉴定所培养细胞为PASMC;Ⅱ组引起PASMC增殖率升高(90.26±30.12),S期细胞百分比增加(35.90±0.73),DNA合成增加(4890±372)的作用可以被Ⅲ、Ⅳ组的rhBMP-2抑制(66.29±27.19、15.90±0.61、3390±198,P<0.01),同时Ⅲ、Ⅳ组的rhBMP-2明显增加了pSmad蛋白量(1.37±0.26,1.68±0.31,P<0.01),并抑制了Cyclin D1 mRNA及蛋白表达(1.38±0.13,1.01±0.10,P<0.01).结论 rhBMP-2可以通过Smad信号转导途径抑制10%FBS培养的PASMC表达Cyclin D1,进而抑制血清刺激引起的PASMC增殖。

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