毕赤酵母醇氧化酶1启动子突变体的分离与鉴定

• 作 者: 熊向华 赵洪亮 薛冲 王洋 陈惠鹏 刘志敏
• 机 构: 军事医学科学院生物工程研究所
• 出 处: 生物技术通讯
• 发表日期: 2008年1期
• 关键词: 毕赤酵母 醇氧化酶1基因启动子 致错PCR 人血清白蛋白 Pichia pastoris AOX1 promoter random mutagenesis

目的：通过醇氧化酶1启动子突变，筛选毕赤酵母高水平表达菌株。方法：通过致错PCR构建醇氧化酶1启动子突变体，经酶切连接到改造过的质粒HSA-pPIC9上，转化毕赤酵母GS115感受态细胞，摇瓶培养表达筛选人血清白蛋白（HSA）高表达突变体菌株。结果：克隆测序结果表明，突变的醇氧化酶1启动子-910和-569位点处共2个碱基发生了T→C突变；获得一株高表达菌株，摇瓶中HSA的表达量由200mg／L提高到335mg／L。结论：通过醇氧化酶1启动子突变成功构建了HSA高表达菌株。