抗四环素单链抗体基因的构建与序列测定

• 作 者: 左伟勇 王永娟 陆辉 洪伟鸣 刘莉
• 机 构: 江苏农牧科技职业学院/江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室
• 出 处: 生物技术通讯
• 发表日期: 2013年6期
• 关键词: 四环素 单链抗体 测序 tetracycline single chain variable fragment sequencing

目的：构建抗盐酸四环素的单链抗体（scFv）基因。方法：以抗盐酸四环素单克隆抗体杂交瘤细胞株的总RNA为模板，用RT-PCR法扩增全套抗体轻、重链基因；经重叠延伸反应，以编码柔性多肽（GIy4Ser）3的基因为接头，将轻、重链基因组装为完整的seFv基因，并克隆到pGEMT-Easy载体中进行测序分析。结果：所克隆的四环素scFV基因全长为735 bp，为VH-Linker-VL结构，VH基因为354bp，Linker为（Gly4Ser）3多肽的核酸序列，VL基因为336 bp。结论：构建了抗四环素的单链