重组dystrophin的表达并将其定位于细胞膜

来源 :国外医学(分子生物学分册) | 被引量 : 0次 | 上传用户:lxhcoolrr
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Duchenne肌营养障碍(DMD)是一种X连锁进行性肌病,它由于DMD基因位点一缺陷所致。对应DMD位点的基因产生14kb mRNA,它编码一种大的细胞骨架膜蛋白dystrophin(营养不良素)。本文作者报道了一种简便方法,以此克隆具完整长度的小鼠dystrophin cDNA,并在COS细胞中进行表达。实验中使用具9 kb插入范围的λ噬菌体克隆载体,14kb的dystrophin以2个大片段形式被克隆。使用dystrophin特异性引物(它们分别定位于3’端和以第7 858核苷酸为起始点)构建2个cDNA文库(A和B)。而后为确定大的叠加 Duchenne Muscular Dystrophy (DMD) is an X-linked progressive myopathy that is caused by a defect in the DMD gene locus. The gene corresponding to the DMD site produces a 14kb mRNA that encodes a large dystrophin (malnutrition). The authors of the paper reported a convenient way to clone mouse dystrophin cDNA with full length and to express it in COS cells. In the experiment, a λ phage cloning vector with a 9 kb insertion range was used, and a 14 kb dystrophin was cloned as two large fragments. Two cDNA libraries (A and B) were constructed using dystrophin-specific primers that are located at the 3 ’end and starting at nucleotide 7 858, respectively. Then to determine the big overlay
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