【摘 要】
：
目的 优化曼氏(欧猥)迭宫绦虫半胱氨酸蛋白酶(Spirometra erinaceieuropaei cysteine protease,SeCP)基因的体外表达条件. 方法 对含有SeCP基因重组表达质粒pMAL-c2X-SeCP的
【机 构】
：
郑州大学医学院寄生虫学教研室,河南郑州,450052
论文部分内容阅读
目的 优化曼氏(欧猥)迭宫绦虫半胱氨酸蛋白酶(Spirometra erinaceieuropaei cysteine protease,SeCP)基因的体外表达条件. 方法 对含有SeCP基因重组表达质粒pMAL-c2X-SeCP的大肠埃希菌TB1在不同培养温度、不同诱导剂异丙基硫代β-D-半乳糖苷(isopropyl-1-thio-β-galactopyranoside,IPTG)浓度及不同培养时间等条件下进行诱导表达,通过SDS-PAGE与蛋白图谱扫描分析重组SeCP蛋白(rSeCP)的表达水平,选择rSeCP适宜的体外表达条件. 结果 SDS-PAGE显示重组质粒pMAL-c2X-SeCP转化大肠埃希菌TB1在常规诱导条件(培养温度30℃,1 mmol/LIPTG诱导培养4h)下,rSeCP以可溶性蛋白和包涵体2种形式表达.当重组菌TB1在28、30、31、32、34、35及37℃条件下培养时,rSeCP的表达量分别占全菌上清蛋白量的9.4％、15.1％、12.2％、6.6％、6.4％、5.4％和1.2％;当重组菌TB1在30℃条件下IPTG终浓度0.1、0.2、0.5及1.0 mmol/L诱导时,rSeCP表达量分别占全菌总蛋白量的32.6％、25.7％、26.7％和25.7％;当重组菌TB1在30℃条件下IPTG终浓度0.1 mmol/L诱导培养1、2、3、4、5和6h,rSeCP的表达量分别占全菌总蛋白量的13.4％、18.6％、22.4％、33.2％、45.2％和34.6％. 结论 培养温度为30℃,IPTG终浓度为0.1 mmol/L诱导培养5h,为重组质粒pMAL-c2X-SeCP转染大肠埃希菌TB1表达rSeCP最佳条件,该研究为大量制备和纯化rSeCP奠定了基础.
其他文献
目的采用PCR检测肺炎链球菌(S.pn)毒力基因psaA和ply,研究分析两个毒力基因的特异性,为S.pn临床诊断提供依据。方法对广东省12家医疗机构诊断为S.pn感染患者的654份标本,经过
目的:观察内皮抑素对裸鼠骨肉瘤皮下移植模型血管生成和肿瘤生长的抑制作用,探讨其抑瘤机制及人体骨肉瘤生物治疗新方法. 方法:Transwell双室模型观察内皮抑素对骨肉瘤细
目的 克隆牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿P卜2a辅助蛋白AP2基因,并进行序列分析. 方法 根据Gen-Bank公布的牛源无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a的AP2基因序列,使用生物信息学软件Primer
目的:探讨数字减影血管造影(Digitalsubtractionangiongraphy,DSA)机引导下经皮穿刺椎体成形术(Percutaneousvertebroplasty,PVP)治疗脊柱转移瘤患者的临床疗效. 方法:将1
截瘫后异位骨化(HeterotopicOssificationinParaplegia),又称为神经性骨化性肌炎等.本文对2例截瘫后异位骨化的X线表现进行了分析。
目的研究内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)与胃泌素(Gastrin,GAS)在胃癌中的表达以及与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化法检测VEGF、GAS在
目的通过穿刺胸腺组织诊断胸腺肿瘤,注入抗肿瘤药物治疗重症肌无力等.方法解剖观察成尸标本37具,观测胸腺的位置、形态,经皮穿刺进针点及深距.结果胸腺位于胸骨后方长88.3±2
骨化性纤维瘤与非骨化性纤维瘤临床少见,文献报道很少、而两种疾病同时报导,尚未见文献报导,骨化性纤维瘤与非骨化性纤维瘤是两种不同的疾病,发病机理及发生部位截然不同,但
目的 采用常规PCR、巢式PCR(Nest PCR,nPCR)和定量PCR(Quantitative PCR,qPCR)检测耶氏肺孢子菌(Pneumoc ystisjirovecii,Pj)特异性核酸片段,调查脑瘤手术患者咽喉部吸取液中
目的:探讨透明细胞肉瘤的临床特点,评价治疗结果及其影响因素. 方法:对1990～2004年收治的17例透明细胞肉瘤进行回顾性分析并结合复习文献,其中14例曾于外院行局部切除术,10