【摘 要】
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本试验旨在建立一种快速、特异、敏感的双重PCR鉴定猪链球菌和马链球菌兽疫亚种病原检测方法。根据猪链球菌GDH蛋白和马链球菌类M蛋白的基因保守区分别设计引物,优化了该双重P
【机 构】
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山东省滨州畜牧兽医研究院,山东绿都生物科技有限公司
【基金项目】
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山东省现代农业产业技术体系生猪创新团队建设项目;山东省滨州畜牧兽医研究院自主创新项目(201002);山东绿都生物科技有限公司技术创新项目(201003)
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本试验旨在建立一种快速、特异、敏感的双重PCR鉴定猪链球菌和马链球菌兽疫亚种病原检测方法。根据猪链球菌GDH蛋白和马链球菌类M蛋白的基因保守区分别设计引物,优化了该双重PCR检测方法的引物浓度及比例,并筛选了其最佳退火温度;用该双重PCR反应体系以其他几株阴性菌株为对照,检测了该反应体系的特异性。以新鲜培养的猪链球菌倍比稀释后进行菌落计数,对该检测方法的敏感性进行了鉴定。M—like和GDH引物的加入量均为1μL(20pmol/L),最佳退火温度为52.3℃;该双重PCR反应体系有较高敏感性,检测马链球菌
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