【摘 要】
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目的制备适于重组CHO细胞培养的无血清培养基(Serum-free medium,SFM)。方法在本室制备的无血清、低蛋白培养基SFMC的基础上,开发支持重组CHO-K1细胞生长的无动物源、无蛋白
【机 构】
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华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,
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目的制备适于重组CHO细胞培养的无血清培养基(Serum-free medium,SFM)。方法在本室制备的无血清、低蛋白培养基SFMC的基础上,开发支持重组CHO-K1细胞生长的无动物源、无蛋白培养基(Protein-free midium,PFM,以柠檬酸铁、硫酸锌和酵母水解物替换SFMC中的转铁蛋白、胰岛素和动物组织水解物)及化学成分确定的培养基(Chemically definedmedium,CDM,以PFM培养基为基础,通过调整和优化氨基酸的浓度和其他部分营养物质浓度制备),评价各种无血清培养基的适应性、稳定性以及冻存、复苏性能,并分别在125 ml摇瓶和1.4 L生物反应器中进行培养。结果 CHO-K1细胞在PFM和CDM中生长良好,经125 ml摇瓶培养,最高细胞密度分别为9.3×106和7.3×106个/ml,最大细胞密度与SFMC培养基相比,分别提高了107%和62%。经1.4 L搅拌式生物反应器流加培养,PFM培养基的最高细胞密度可达9.8×106个/ml,培养216 h时,细胞活性仍维持在80%,重组蛋白表达量达110.5 mg/L;采用CDM培养基经流加培养,CHO-K1细胞最大密度可达9.5×106个/ml,但细胞培养时间较PFM培养基短。结论在SFMC培养基的基础上,成功开发出培养效果更优的PFM和CDM培养基。
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