【摘 要】
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目的 研究低温保存对人骨髓基质干细胞(BMSCs)在脱钙骨(DBM)上生长特性及成骨能力的影响.方法 取3例志愿者骨髓(3～5 mL),密度梯度离心、差速贴壁法获得BMSCs.第3代BMSCs在-196℃下保存24 h,37℃复苏,测定细胞成活率.低温保存前、后的BMSCs分别用成骨诱导液诱导培养,至90%融合时,收集细胞接种在DBM支架上,并测定细胞在DBM上的粘附率.DiI荧光染料标记BMSC
【机 构】
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200235,上海组织工程研究与开发中心,200235,上海组织工程研究与开发中心,200235,上海组织工程研究与开发中心,200235,上海组织工程研究与开发中心,200235,上海组织工程研究与
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目的 研究低温保存对人骨髓基质干细胞(BMSCs)在脱钙骨(DBM)上生长特性及成骨能力的影响.方法 取3例志愿者骨髓(3～5 mL),密度梯度离心、差速贴壁法获得BMSCs.第3代BMSCs在-196℃下保存24 h,37℃复苏,测定细胞成活率.低温保存前、后的BMSCs分别用成骨诱导液诱导培养,至90%融合时,收集细胞接种在DBM支架上,并测定细胞在DBM上的粘附率.DiI荧光染料标记BMSCs,倒置相差显微镜、荧光显微镜和SEM观察低温保存前、后的BMSCs在DBM上的生长及基质分泌情况,MTT法测定细胞在DBM上的增殖活性.通过测定碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素(OCN)含量观察细胞在DBM上的成骨能力.结果 复苏细胞的存活率为(90.24±0.02)%.低温保存前、后的BMSCs在DBM上的粘附率分别为(97.25±1.17)%和(97.00±1.09)%.倒置相差显微镜及SEM观察显示低温保存前、后的BMSCs在DBM上粘附、生长良好,有大量细胞外基质分泌、沉积.低温保存前、后的BMSCs在DBM上MTY吸光度值和ALP活性的检测结果差异无显著性意义(P＞0.05);体外培养12 d时,MTT吸光度值及ALP活性同时达到峰值.低温保存前、后的BMSCs在DBM上分泌OCN的量差异无显著性意义(P＞0.05),OCN含量随着培养时间延长而不断上升,在观察期(16 d)内未出现平台期.结论 低温保存对人BMSCs在DBM上的体外增殖、粘附及成骨能力影响差异无显著性意义,低温保存的人BMSCs可作为组织工程骨的种子细胞。
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