【摘 要】
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目的构建重组人白细胞介素10(recombinant human interleukin 10,rhIL-10)融合蛋白的表达载体,并在大肠杆菌中表达.方法应用RT-PCR方法扩增IL-10基因,克隆PCR产物,构建PCR(R)
【机 构】
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武汉大学医学院,武汉,430071美国霍普金斯大学医学院,Baltimore,MD21287-365;
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目的构建重组人白细胞介素10(recombinant human interleukin 10,rhIL-10)融合蛋白的表达载体,并在大肠杆菌中表达.方法应用RT-PCR方法扩增IL-10基因,克隆PCR产物,构建PCR(R)T7/NT-TOPO(R)-IL-10重组质粒,以Appied Biosystems 3 700 DNA分析仪进行分析.构建成功的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysE细胞,经12%SDS-PAGE鉴定融合表达蛋白.结果 PCR(R)T7/NT-TOPO(R)质粒已载入rhIL-10基因,其序列与理论设计完全一致,表达质粒在BL21(DE3)pLysE中得到高效表达,产物主要以包涵体形式存在.结论已成功构建重组PCR(R)T7/NT-TOPO(R)-IL-10质粒载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)pLysE细胞内高效表达.
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