【摘 要】
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目的 观察不同浓度柚皮苷(naingin,NG)对白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的兔关节软骨细胞炎性反应的影响,探讨NG治疗骨关节炎的潜力.方法 体外正常培养的兔关节软骨
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院,湖北武汉430015;武汉体育学院研究生院,湖北武汉430079;武汉大学同仁医院(武汉市第三医院),湖北武汉430074;湖北中医药大学针灸骨伤学院,湖北武汉
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目的 观察不同浓度柚皮苷(naingin,NG)对白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的兔关节软骨细胞炎性反应的影响,探讨NG治疗骨关节炎的潜力.方法 体外正常培养的兔关节软骨细胞用IL-1β进行炎性诱导,造软骨关节炎细胞模型.用荧光倒置显微镜观察及吖啶橙、甲苯胺蓝染色鉴定软骨细胞,运用CCK-8检测细胞活性来筛选NG浓度;取第2代生长良好的软骨细胞,根据所加培养物的不同将实验分为5组:空白组(C)、模型组(M)、观察组(OH、OM、OL),连续干预72 h,于RNA和蛋白提取前24 h加入IL-1β.通过qRT-PCR和Western Blot检测蛋白聚糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原(CoL-Ⅱ)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)和SOX9的表达.结果 ①吖啶橙及甲苯胺蓝染色结果呈阳性,体外分离培养的确为软骨细胞.②CCK-8表明,NG浓度在大于10-5mol/L和小于10-9mol/L时,细胞活性较空白组减弱(P＜0.05),NG浓度在10-6mol/L到10-8mol/L时,细胞活性增强(P ＜0.05,P ＜0.01).③qRT-PCR显示:与空白组相比,模型组CoL-Ⅱ、Aggrecan和SOX9表达量显著降低(P ＜0.05,P ＜0.01),MMP-13表达量升高(P＜0.05);与模型组比,CoL-Ⅱ、SOX9和Aggrecan明显升高(P＜0.05,P＜0.01),MMP-13表达量显著降低(P＜ 0.05,P＜ 0.01).④Western Blot显示,与正常组比,模型组CoL-Ⅱ、SOX9和Aggrecan表达量均显著降低(P ＜0.05,P ＜0.01),MMP-13表达量升高(P＜0.05);与模型组比,NG不同浓度的CoL-Ⅱ、SOX9和Aggrecan表达量均上升;MMP-13下降,且有浓度依赖趋势.结论 柚皮苷可以调节软骨细胞基质和炎性微环境,促进软骨细胞CoL-Ⅱ、SOX9、Aggrecan的表达,并抑制MMP-13,进而逆转IL-1β诱导的软骨细胞炎性退变.
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