【摘 要】
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目的 探讨β-谷甾醇对人卵巢颗粒细胞系(KGN)增殖、凋亡及P-PI3KCA、P-AKT和Caspase-3蛋白表达的影响.方法 体外培养KGN细胞,分为对照组和β-谷甾醇处理组,CCK-8测定添加10、
【机 构】
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宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室,银川 750004;宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室,银川 750004;宁夏医科大学总医院干细胞研究所,银川 750004
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目的 探讨β-谷甾醇对人卵巢颗粒细胞系(KGN)增殖、凋亡及P-PI3KCA、P-AKT和Caspase-3蛋白表达的影响.方法 体外培养KGN细胞,分为对照组和β-谷甾醇处理组,CCK-8测定添加10、20、40和80μmol·L-1β-谷甾醇的KGN细胞的增殖情况以及20μmol·L-1β-谷甾醇的KGN细胞在12、24、36和48 h细胞的增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡及周期分布,细胞免疫荧光检测KGN细胞内P-PI3KCA、P-AKT和凋亡家族Caspase-3蛋白定位和分布,Western blot检测PI3K/AKT/mTOR通路关键蛋白P-PI3KCA、PI3K、AKT、P-AKT和凋亡家族Caspase-3蛋白表达.结果 CCK-8结果显示,与对照组相比较,添加20μmol·L-1β-谷甾醇作用于KGN细胞,在24 h细胞分裂增殖能力增强(P<0.01);细胞周期结果显示,添加20μmol·L-1β-谷甾醇处理24 h后KGN细胞周期显示G0/G1期细胞所占比例减少,S+G2/M期细胞所占比例增加;细胞凋亡结果表明,β-谷甾醇处理组KGN细胞总凋亡率低于对照组(P<0.05);细胞免疫荧光显示,P-PI3KCA、P-AKT和Caspase-3在KGN细胞胞核和胞质有表达,Western blot结果显示,β-谷甾醇处理组KGN细胞中P-PI3KCA、P-AKT蛋白相对表达量上调,Caspase-3蛋白表达下调(P均<0.05).结论 β-谷甾醇可促进颗粒细胞增殖,抑制凋亡,其机制与PI3K/AKT信号通路有关.
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