【摘 要】
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目的 :克隆编码严重急性呼吸综合征冠状病毒 (SARS CoV)N蛋白的DNA ,构建原核表达质粒pGEX 2T/N ,并诱导表达。方法 :采用RT PCR方法从病毒培养液中获得N基因片段 ,并克隆入T
【机 构】
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目的 :克隆编码严重急性呼吸综合征冠状病毒 (SARS CoV)N蛋白的DNA ,构建原核表达质粒pGEX 2T/N ,并诱导表达。方法 :采用RT PCR方法从病毒培养液中获得N基因片段 ,并克隆入T EASY载体中。经PCR、双酶切鉴定后 ,测序。将N蛋白基因序列定向插入原核表达载体pGEX 2T中 ,表达融合蛋白。用表达产物与抗SARS CoV抗体阳性血清做Westernblot。结果 :N蛋白DNA测序的结果与GenBank比对缺失 2 0个bp。GST N融合蛋白以可溶形式表达。Westernblot检测表明 ,其与抗SARS CoV抗体阳性血清的反应呈阳性。结论 :成功地构建原核表达质粒pGEX 2T/N ,并表达GST N融合蛋白 ,为下一步的研究奠定了基础。
OBJECTIVE: To clone the DNA encoding the N protein of SARS CoV (SARS CoV) and construct the prokaryotic expression plasmid pGEX 2T / N and induce its expression. Methods: The N gene fragment was obtained from the virus culture by RT PCR and cloned into T EASY vector. After PCR, double enzyme digestion, sequencing. The N protein gene sequence was inserted into the prokaryotic expression vector pGEX 2T to express the fusion protein. Western blot was performed using the expressed product and anti-SARS CoV antibody-positive sera. Results: The result of N protein DNA sequencing showed a 20 bp deletion in comparison with GenBank. GST N fusion protein is expressed in soluble form. Western blot analysis showed that it reacted positively with anti-SARS CoV antibody-positive sera. Conclusion: The prokaryotic expression plasmid pGEX 2T / N was successfully constructed and the GST N fusion protein was expressed, which laid the foundation for the further study.
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