【摘 要】
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目的 研究miR-429对人U87胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及可能机制.方法 培养人U87胶质瘤细胞,应用Lipofectamine(R) LTX试剂将pre-miR-429质粒载体以及anti-miR-429质粒载体分别稳定转染人U87胶质瘤细胞;应用Real-time-PCR验证转染效率;应用CCK-8试剂盒检测miR-429对人U87胶质瘤细胞增殖能力的影响;应用Real-time PCR和Western blot检测人U87胶质瘤细胞中接头蛋白CRKL(v-crk avian sarcoma vi
【机 构】
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中国医科大学附属盛京医院神经外科,辽宁沈阳,110004;中国医科大学基础医学院神经生物教研室,辽宁沈阳,110122
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目的 研究miR-429对人U87胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及可能机制.方法 培养人U87胶质瘤细胞,应用Lipofectamine(R) LTX试剂将pre-miR-429质粒载体以及anti-miR-429质粒载体分别稳定转染人U87胶质瘤细胞;应用Real-time-PCR验证转染效率;应用CCK-8试剂盒检测miR-429对人U87胶质瘤细胞增殖能力的影响;应用Real-time PCR和Western blot检测人U87胶质瘤细胞中接头蛋白CRKL(v-crk avian sarcoma virus CT10 oncogene homolog-like,CRKL)的mRNA和蛋白表达含量变化;将CRKL分别转染至U87胶质瘤细胞和miR-429过表达的U87胶质瘤细胞,应用CCK-8试剂盒检测人U87胶质瘤细胞增殖,应用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化,应用Western blot法检测凋亡相关蛋白caspase-3和Bcl-2的蛋白表达变化. 结果 与对照组相比,miR-429过表达显著抑制了人U87胶质瘤细胞增殖,明显诱导了凋亡发生,显著降低了CRKLmRNA和蛋白在人U87胶质瘤细胞的表达水平,caspase-3的表达水平显著上调,Bcl-2的表达水平显著降低.CRK过表达显著增强了人U87胶质瘤细胞增殖能力并且抑制了细胞凋亡,caspase-3的表达水平显著下调,Bcl-2的表达水平显著增强;CRKL过表达有效阻断了miR-429上调caspase-3、降低Bd-2的作用,有效阻断了miR-429抑制U87胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡的作用.结论 MiR-429抑制CRKL从而降低人U87胶质瘤细胞的增殖能力,诱导细胞凋亡.
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