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摘要：
目的：对广西特产中药三七（Panaxnotoginseng （Burk.） F. H. Chen） 中人参皂苷Re的分离纯化及结构鉴定。方法：用80%乙醇水对8.9 kg三七根粉末进行回流提取，再利用液液萃取、硅胶柱色谱、D101大孔树脂柱色谱、重结晶等方法对三七根的化学成分进行分离纯化，并根据其理化性质和利用现代波谱学手段（NMR）对分离得到的一个化合物进行结构解析。结果：从广西三七的根80%乙醇提取物的正丁醇层分离、纯化、鉴定了一个化合物。结论：从广西三七根部80%乙醇提取物中分离鉴定了人参皂苷Re。
关键词：三七；三七皂苷；人参皂苷；人参皂苷Re
【中图分类号】
R749.053 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763（2014）06-0053-01
三七（Panaxnotoginseng （Burk.） F. H. Chen），又名田七、人参三七、田三七、山漆等[1]，为五加科人参属植物[2]，主产于广西、云南及四川等地，是临床常用传统中药。研究表明，三七含有皂苷、黄酮、多糖、氨基酸、挥发油等多种有效成分，其中皂苷含量最高[3，4]。现代药理研究表明，三七在血液系统、心血管系统、神经系统、免疫系统以及抗炎、抗衰老、抗肿瘤等方面有活性作用[5-7]。本文利用液液萃取、硅胶柱色谱、D101大孔树脂柱色谱[8]对三七干燥根的80%乙醇提取物化学成分进行研究，分离并鉴定了三七中人参皂苷Re，并大量富集了该化合物，为开发新药提供了物质基础。
1 实验部分
1.1 三七根的提取及萃取实验：
三七（Panaxnotoginseng （Burk.） F. H. Chen）干燥根8.9 kg，打粉后用10倍量80%乙醇水回流提取3次[9]，每次1.5小时，合并提取液，减压回收溶剂，浓缩后得到总浸膏（1.8 kg）。
总浸膏分散到适量的水中，分别用等体积的二氯甲烷、正丁醇萃取三次，用旋转蒸发仪45℃减压回收有机溶剂后分别得到二氯甲烷层浸膏（SC，72 g），正丁醇层浸膏（SBu ，1517 g）。
1.2 人参皂苷Re分离纯化过程：
将1517g 正丁醇层浸膏用适量水溶解，过滤澄清后上大孔树脂色谱柱，依次用蒸馏水，30%乙醇，50%乙醇，70%乙醇，95%乙醇梯度洗脱，根据薄层显示，将洗脱液合并为5个流分。分别为SBu-1～SBu-5。取其中SBu-3流分再上大孔树脂色谱柱，依次用30%乙醇，50%乙醇洗脱，得SBu-3-1，SBu-3-2两个流分。
将256g SBu-3-2浸膏用甲醇溶解，过滤，滤液加入200-300目柱层析用硅胶约500g，拌匀，挥干溶剂。采用硅胶柱色谱分离样品SBu-3-2，用二氯甲烷-甲醇二元体系梯度洗脱，根据薄层显示，将洗脱液合并为3个流分。分别为SBu-3-2-1～5，SBu-3-2-6，SBu-3-2-7。
SBu-3-2-6流分静置后析出白色沉淀，过滤，将白色粉末用甲醇和水混合溶剂重结晶，得化合物1（3g），为白色粉末。
1.3 纯度鉴定
图2 化合物1的高效液相图谱
Fig 2 HPLC of compound 1
HPLC液相分析条件
仪器：岛津高效液相色谱仪LC-20A；柱子：岛津WondaSilTM C18（4.6×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水（53：47）；检测器：SPD-20A紫外检测器；柱温：30℃；流速：1.0ml/min；
经过液相分析，这个化合物的纯度为98.2%。
2 化合物结构解析
白色粉末，易溶于甲醇、乙醇、吡啶，Liebermann-Burchard反应阳性[10]，薄层酸水解检出葡萄糖和鼠李糖[11]，提示其可能为萜类或甾体皂苷类化合物。在1H-NMR （600MHz，pyridine-d5）谱中，髙场区给出8个角甲基质子信号，分别为δ 0.95 （3H，s，H-30），0.97 （3H，s，H-19），1.17 （3H，s，H-18），1.35 （3H，s，H-29），1.58 （3H，s，H-21），1.59 （3H，s，H-27），1.60 （3H，s，H-26），2.10 （3H，s，H-28）；低场区给出一个烯氢信号δ 5.24 （1H，t，J = 7.3 Hz）[12]；另外2个糖残基的端基质子信号δ 5.25 （1H，d，J = 7.0 Hz），5.16 （1H，d，J = 7.7 Hz），根据其偶合常数，推测有两个糖残基的端基构型均为β型，δ 6.48 （1H，brs.）为鼠李糖残基的端基质子信号，根据其偶合常数，推测其端基构型为α构型。13C-NMR （150MHz，pyridine-d5）谱中给出48个碳信号，其中包括八个甲基碳信号；两个sp2杂化的碳信号δ 130.9、126.0；3个连二氧的sp3杂化的碳信号δ 101.9、101.8、98.2；18个连氧的sp3杂化的碳信号，其余均为sp3杂化的碳信号，推测此化合物为达玛烷三萜皂苷，而依据δ 60.8 （C-5）可确定为原人参三醇型达玛烷三萜皂苷[13，14]。该化合物的核磁数据与文献报道人参皂苷Re[15]的相比，基本一致，因此将该化合物鉴定为ginsenoside Re。
3 讨论
通过实验大量富集了三七的主要化学成分人参皂苷Re， 为创新药物研究提供了原料药，对开发三七新产品具有重要意义，这将带来良好的社会效益和经济效益。
参考文献
[1] 刘刚，鲍建材，郑友兰，等.三七的化学成分研究进展.人参研究.2004，2：10-18
[2] 国家药典委员，中华人民共和国药典2010版第一部.北京：中国医药科技出版社，2010：11-12
[3] 仉燕崃，李楠，李晓菲，等.HPLC测定三七粉及三七片中人参皂苷Rgl三七皂苷R 1的含量.中成药.2006，28（12）：1851-1852
[4] 张莉.三七的化学成分及临床应用.中医函授通讯.1996，1：32
[5] 杨志刚，陈阿琴，俞颂东.三七药理研究新进展[J].上海中医药杂志.2005，39（4）：59-61
[6] 周家明，崔秀明，曾江，等.三七各部位单体皂苷成分研究进展与活性利用探讨.中药材.2007，30（12）：1615-1618
[7] 宋维朴.中药三七的化学成分、药理作用及临床应用.大家健康.2011，5（8）：53-54
[8] 张崇喜.人参，西洋参和三七化学成分的研究.吉林农业大学博士学位论文.2004：99
[9] 周家明，曾江，崔秀明，等.三七根茎的化学成分研究I.中国中药杂志.2007，32（4）：349-350
[10] 吴剑峰主编.天然药物化学.北京：高等教育出版社.2006：330-331
[11] 张晓丽，吴品昌，史锐，等.中药多糖苷结构中单糖种类的分析研究.吉林中医药.2011，31（6）：584-585
[12] 姚新生主编.有机化合物波谱分析.北京：中国医药科技出版社.2004：130-131
[13] O. Tanaka. Application of C-nuclear magnetic resonance spectrometry to structural studies on glycosides： saponins of Panax spp. and natural sweet glycosides[J].YakugakuZasshi， 1985， 105， 323-351
[14] 吴立军编著.实用有机化合物光谱解析.北京：人民卫生出版社，2009：608-628
[15] 李海舟，张颖君，杨崇仁， 三七叶化学成分的进一步研究[J].天然产物研究与开发. 2006，18：549-554
目的：对广西特产中药三七（Panaxnotoginseng （Burk.） F. H. Chen） 中人参皂苷Re的分离纯化及结构鉴定。方法：用80%乙醇水对8.9 kg三七根粉末进行回流提取，再利用液液萃取、硅胶柱色谱、D101大孔树脂柱色谱、重结晶等方法对三七根的化学成分进行分离纯化，并根据其理化性质和利用现代波谱学手段（NMR）对分离得到的一个化合物进行结构解析。结果：从广西三七的根80%乙醇提取物的正丁醇层分离、纯化、鉴定了一个化合物。结论：从广西三七根部80%乙醇提取物中分离鉴定了人参皂苷Re。
关键词：三七；三七皂苷；人参皂苷；人参皂苷Re
【中图分类号】
R749.053 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763（2014）06-0053-01
三七（Panaxnotoginseng （Burk.） F. H. Chen），又名田七、人参三七、田三七、山漆等[1]，为五加科人参属植物[2]，主产于广西、云南及四川等地，是临床常用传统中药。研究表明，三七含有皂苷、黄酮、多糖、氨基酸、挥发油等多种有效成分，其中皂苷含量最高[3，4]。现代药理研究表明，三七在血液系统、心血管系统、神经系统、免疫系统以及抗炎、抗衰老、抗肿瘤等方面有活性作用[5-7]。本文利用液液萃取、硅胶柱色谱、D101大孔树脂柱色谱[8]对三七干燥根的80%乙醇提取物化学成分进行研究，分离并鉴定了三七中人参皂苷Re，并大量富集了该化合物，为开发新药提供了物质基础。
1 实验部分
1.1 三七根的提取及萃取实验：
三七（Panaxnotoginseng （Burk.） F. H. Chen）干燥根8.9 kg，打粉后用10倍量80%乙醇水回流提取3次[9]，每次1.5小时，合并提取液，减压回收溶剂，浓缩后得到总浸膏（1.8 kg）。
总浸膏分散到适量的水中，分别用等体积的二氯甲烷、正丁醇萃取三次，用旋转蒸发仪45℃减压回收有机溶剂后分别得到二氯甲烷层浸膏（SC，72 g），正丁醇层浸膏（SBu ，1517 g）。
1.2 人参皂苷Re分离纯化过程：
将1517g 正丁醇层浸膏用适量水溶解，过滤澄清后上大孔树脂色谱柱，依次用蒸馏水，30%乙醇，50%乙醇，70%乙醇，95%乙醇梯度洗脱，根据薄层显示，将洗脱液合并为5个流分。分别为SBu-1～SBu-5。取其中SBu-3流分再上大孔树脂色谱柱，依次用30%乙醇，50%乙醇洗脱，得SBu-3-1，SBu-3-2两个流分。
将256g SBu-3-2浸膏用甲醇溶解，过滤，滤液加入200-300目柱层析用硅胶约500g，拌匀，挥干溶剂。采用硅胶柱色谱分离样品SBu-3-2，用二氯甲烷-甲醇二元体系梯度洗脱，根据薄层显示，将洗脱液合并为3个流分。分别为SBu-3-2-1～5，SBu-3-2-6，SBu-3-2-7。
SBu-3-2-6流分静置后析出白色沉淀，过滤，将白色粉末用甲醇和水混合溶剂重结晶，得化合物1（3g），为白色粉末。
1.3 纯度鉴定
图2 化合物1的高效液相图谱
Fig 2 HPLC of compound 1
HPLC液相分析条件
仪器：岛津高效液相色谱仪LC-20A；柱子：岛津WondaSilTM C18（4.6×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水（53：47）；检测器：SPD-20A紫外检测器；柱温：30℃；流速：1.0ml/min；
经过液相分析，这个化合物的纯度为98.2%。
2 化合物结构解析
白色粉末，易溶于甲醇、乙醇、吡啶，Liebermann-Burchard反应阳性[10]，薄层酸水解检出葡萄糖和鼠李糖[11]，提示其可能为萜类或甾体皂苷类化合物。在1H-NMR （600MHz，pyridine-d5）谱中，髙场区给出8个角甲基质子信号，分别为δ 0.95 （3H，s，H-30），0.97 （3H，s，H-19），1.17 （3H，s，H-18），1.35 （3H，s，H-29），1.58 （3H，s，H-21），1.59 （3H，s，H-27），1.60 （3H，s，H-26），2.10 （3H，s，H-28）；低场区给出一个烯氢信号δ 5.24 （1H，t，J = 7.3 Hz）[12]；另外2个糖残基的端基质子信号δ 5.25 （1H，d，J = 7.0 Hz），5.16 （1H，d，J = 7.7 Hz），根据其偶合常数，推测有两个糖残基的端基构型均为β型，δ 6.48 （1H，brs.）为鼠李糖残基的端基质子信号，根据其偶合常数，推测其端基构型为α构型。13C-NMR （150MHz，pyridine-d5）谱中给出48个碳信号，其中包括八个甲基碳信号；两个sp2杂化的碳信号δ 130.9、126.0；3个连二氧的sp3杂化的碳信号δ 101.9、101.8、98.2；18个连氧的sp3杂化的碳信号，其余均为sp3杂化的碳信号，推测此化合物为达玛烷三萜皂苷，而依据δ 60.8 （C-5）可确定为原人参三醇型达玛烷三萜皂苷[13，14]。该化合物的核磁数据与文献报道人参皂苷Re[15]的相比，基本一致，因此将该化合物鉴定为ginsenoside Re。
3 讨论
通过实验大量富集了三七的主要化学成分人参皂苷Re， 为创新药物研究提供了原料药，对开发三七新产品具有重要意义，这将带来良好的社会效益和经济效益。
参考文献
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[12] 姚新生主编.有机化合物波谱分析.北京：中国医药科技出版社.2004：130-131
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