【摘 要】
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利用PCR技术构建RGD短肽与人肿瘤坏死因子凋亡配体(胞外区114~281)的融合基因,将该DNA片段克隆到原核表达载体pET-11a中.重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后可表达相对
【机 构】
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安徽医科大学分子生物学实验室,安徽省生物研究所,安徽安科生物工程股份有限公司
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利用PCR技术构建RGD短肽与人肿瘤坏死因子凋亡配体(胞外区114~281)的融合基因,将该DNA片段克隆到原核表达载体pET-11a中.重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后可表达相对分子质量约为20 000的目的蛋白,占菌体蛋白的20%左右,且大多数重组蛋白以不溶的包涵体形式存在.Westem印迹表明目的蛋白具有人sTRAIL的抗原性.表达产物经变性、复性、离子交换层析和分子筛等步骤,可以得到纯度大于95%的RGD-sTRAIL重组蛋白.肿瘤细胞体外实验发现,纯化后的RGD-sTRAI
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