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摘要：目前国内有很多HIV 抗体诊断试剂种类，大部分都采用ELISA法检测抗体。迄今已开发研制的抗原抗体联合的第四代HIV诊断试剂。笔者通过对第三代诊断试剂盒和第四代诊断试剂盒的诊断效果的研究发现，第四代诊断试剂盒具有更高的灵敏性，但特异性较差。
关键词：ELISA法检测抗体；第四代HIV诊断试剂；灵敏性；特异性
中图分类号：R818.052 文献标识码：C 文章编号：1005-0515（2013）10-056-01
引言
目前国内有很多HIV 抗体诊断试剂种类，大部分临床科室都采用第三代诊断试剂，即目前国内流行的ELISA法检测抗体。迄今已开发研制的第四代HIV诊断试剂，它采用抗原抗体联合检测。本血站使用第三代诊断试剂盒和第四代诊断试剂盒对献血者的血液进行检测， 并对两种试剂盒的诊断效果进行对比。
1材料的选取
材料全部取自于本血站2013年1月1日到2013年4月30日的献血者，共5800份，由卫生部临检中心给出5份HIV室间质评献血者的血清以及由康彻思坦有限公司提供的室内质控血清。
2 试剂
第三代与第四代HIV诊断试剂盒分别购于英科新创试剂股份有限公司和北京万泰生物药业有限公司，均被中国药品生物制品检定所批批检定合格， 在有效期内使用，符合国家质量标准。
3方法
严格按照国家标准和试剂盒说明书，对所有血清标本同时使用第三代与第四代HIV诊断试剂进行检测， 并将初次检测为反应性的标本进行双孔复查， 任一种试剂检测结果为反应性及两种试剂为反应性的标本送湖南省疾病预防控制中心性病艾滋病检测中心确认。室间质评标本与质控血清和样本一同进行检测。
4 统计学处理
采用spss6.0统计软件进行统计学处理，两组结果的比较采用χ2 检验。
5 结果
对5800份标本采用两种试剂进行检测， 第三代HIV诊断试剂检测出7例是阳性，但用第四代试剂检测出18 例是阳性的， 其中有3例标本两种试剂均为阳性最后确认阳性， 有1例标本第四代试剂检测为阳性， 但第三代试剂检测为阴性， 最后确认为疑是阳性，电泳条带为P24抗原。
从表1 可以看出，在特异性方面，第四代试剂稍逊于第三代试剂， 这与文献报道一致。另外还有1例经第四代HIV诊断试剂检测为有反应性， 但第三代试剂检测为阴性， 经P24抗原检测为阳性， 经NAT检测为阳性， 说明此标本为窗口期样本。
从表2 看， 两种诊断试剂平行检测室间质评血清， 结果全部达标， 但对于比较弱的阳性标本， 第四代试剂反应性更灵敏些， 即第四代试剂敏感性较强。
讨论
自从1981 年，人们首次发现艾滋病，研究人员从艾滋病患者体内成功分离出其病原体，并发展了血清学抗体检测、唾液检测和尿液测检等常规使用的标准诊断项目。血清学抗体检测从20世纪上叶就得到长足的发展，到现在已经有四代试剂。第一代试剂然敏感性、特异性均较低，它采用病毒裂解抗原包被的ELISA 间接法，。第二代试剂是运用DNA 重组和多肽合成技术，避免细胞培养蛋白导致的非特异性反应，是一种重组抗原的HIV 抗体初筛试剂。1986 年， 在西非的艾滋病病人标本中又分离出另外一种被称为HIV-2的HIV。HIV-2阳性标本用HIV-1筛查试剂抗体检测常常出现漏检的。在1992 年2 月14 日，第一个HIV-1/ HIV-2抗体ELISA 试剂被FDA批准了。1994年发展了起来的第三代H IV 抗体筛查试剂提高试剂的检测敏感性，它是用双抗原夹心法， 以特异性的H IV 抗原作为酶标记物，而不是抗人IgG，这种试剂不需要将标本过度稀释来保证反应的特异性就可以检测包括IgA、I gM、IgG等不同的HIV 抗体亚类。国际上出现的第4 代HIV检测试剂， 它可同时检测HIV-1/ HIV-2两种抗体和p24 抗原， 又称为HIV 抗原/抗体诊断试剂，较第三代试剂每个测试的费用相似， 但敏感性高， 窗口期缩短。这种试剂能够检测早期的血清阳转， 缩短了检测的窗口期， 进一步提高了输血的安全性。
我国国产三代的ELISA试剂和四代HIV检测试剂起步较晚， 但是近年来随着我国科技的迅速发展。到1994 年， 卫生部检定并批准了国产二代HIV-1/ HIV-2 抗体酶标诊断试剂盒。目前国内主要流行的第三代试剂，但是有很多厂家已经推出自己研制的第四代试剂。从1998 年起，根据卫生部要求， 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心国家艾滋病参比实验室对国内的HIV诊断试剂进行临床质量评估， 为国内的HIV诊断试剂用户提供质量信息，诊断试剂进行了连续8年的试剂考评， 得出国产HIV抗体诊断试剂质量的总体水平在逐年提高的结论； 特别是从2000年开始， 国产HIV 诊断试剂从第二代ELISA 间接法筛查试剂提升到第三代双抗原夹心法筛查试剂， 敏感性和特异性已接近国外同类产品水平。目前第四代试剂可同时检测血清中HIV的p24 抗原和抗体。
结论
当今血液安全的最大隐患是HIV窗口期感染。研究表明， 使用第四代HIV试剂可使窗口期可缩短4到5天。同时第四代试剂在检测低滴度的血清标本时其反应性更强，意味着有更高的灵敏度，可以有效的避免漏检， 从而及时筛查出可疑的HIV感染者。但是第四代试剂特异性低于第三代试剂， 使得检测结果出现很多的假阳性，从而增加了工作的复杂性，可对于血液安全却是非常重要的。
参考文献
[1] 王梓，张立红.第四代与第三代HIV诊断试剂检测结果比较[J].中国误诊学杂志，2011，11（3）：577.
[2] 陈豪.预防窗口期献血者导致输血传播人类免疫缺陷病毒的方法[J].检验医学与临床，2013，10（7）：873-874.
[3] 许文燕，邱茂锋，佐合拉·吐尔地，邢文革，蒋岩. 第四代HIV抗原抗体酶联检测试剂缩短HIV检测窗口期的研究[J]. 中华检验医学杂志. 2007（03）
[4] 张麒，佐拉，秦光明，孙显光，许文燕，闫红梅，邢文革，蒋岩. 评估第4代HIV酶联免疫法诊断试剂对静脉吸毒者感染窗口期的检测能力[J]. 中华检验医学杂志. 2006（07）
[5] 许四宏，李秀华，宋爱京，李敬云，鲍作仪，貌盼勇，王佑春. 第4代HIV抗原抗体联合检测试剂的评价[J]. 中国输血杂志. 2006（03）
关键词：ELISA法检测抗体；第四代HIV诊断试剂；灵敏性；特异性
中图分类号：R818.052 文献标识码：C 文章编号：1005-0515（2013）10-056-01
引言
目前国内有很多HIV 抗体诊断试剂种类，大部分临床科室都采用第三代诊断试剂，即目前国内流行的ELISA法检测抗体。迄今已开发研制的第四代HIV诊断试剂，它采用抗原抗体联合检测。本血站使用第三代诊断试剂盒和第四代诊断试剂盒对献血者的血液进行检测， 并对两种试剂盒的诊断效果进行对比。
1材料的选取
材料全部取自于本血站2013年1月1日到2013年4月30日的献血者，共5800份，由卫生部临检中心给出5份HIV室间质评献血者的血清以及由康彻思坦有限公司提供的室内质控血清。
2 试剂
第三代与第四代HIV诊断试剂盒分别购于英科新创试剂股份有限公司和北京万泰生物药业有限公司，均被中国药品生物制品检定所批批检定合格， 在有效期内使用，符合国家质量标准。
3方法
严格按照国家标准和试剂盒说明书，对所有血清标本同时使用第三代与第四代HIV诊断试剂进行检测， 并将初次检测为反应性的标本进行双孔复查， 任一种试剂检测结果为反应性及两种试剂为反应性的标本送湖南省疾病预防控制中心性病艾滋病检测中心确认。室间质评标本与质控血清和样本一同进行检测。
4 统计学处理
采用spss6.0统计软件进行统计学处理，两组结果的比较采用χ2 检验。
5 结果
对5800份标本采用两种试剂进行检测， 第三代HIV诊断试剂检测出7例是阳性，但用第四代试剂检测出18 例是阳性的， 其中有3例标本两种试剂均为阳性最后确认阳性， 有1例标本第四代试剂检测为阳性， 但第三代试剂检测为阴性， 最后确认为疑是阳性，电泳条带为P24抗原。
从表1 可以看出，在特异性方面，第四代试剂稍逊于第三代试剂， 这与文献报道一致。另外还有1例经第四代HIV诊断试剂检测为有反应性， 但第三代试剂检测为阴性， 经P24抗原检测为阳性， 经NAT检测为阳性， 说明此标本为窗口期样本。
从表2 看， 两种诊断试剂平行检测室间质评血清， 结果全部达标， 但对于比较弱的阳性标本， 第四代试剂反应性更灵敏些， 即第四代试剂敏感性较强。
讨论
自从1981 年，人们首次发现艾滋病，研究人员从艾滋病患者体内成功分离出其病原体，并发展了血清学抗体检测、唾液检测和尿液测检等常规使用的标准诊断项目。血清学抗体检测从20世纪上叶就得到长足的发展，到现在已经有四代试剂。第一代试剂然敏感性、特异性均较低，它采用病毒裂解抗原包被的ELISA 间接法，。第二代试剂是运用DNA 重组和多肽合成技术，避免细胞培养蛋白导致的非特异性反应，是一种重组抗原的HIV 抗体初筛试剂。1986 年， 在西非的艾滋病病人标本中又分离出另外一种被称为HIV-2的HIV。HIV-2阳性标本用HIV-1筛查试剂抗体检测常常出现漏检的。在1992 年2 月14 日，第一个HIV-1/ HIV-2抗体ELISA 试剂被FDA批准了。1994年发展了起来的第三代H IV 抗体筛查试剂提高试剂的检测敏感性，它是用双抗原夹心法， 以特异性的H IV 抗原作为酶标记物，而不是抗人IgG，这种试剂不需要将标本过度稀释来保证反应的特异性就可以检测包括IgA、I gM、IgG等不同的HIV 抗体亚类。国际上出现的第4 代HIV检测试剂， 它可同时检测HIV-1/ HIV-2两种抗体和p24 抗原， 又称为HIV 抗原/抗体诊断试剂，较第三代试剂每个测试的费用相似， 但敏感性高， 窗口期缩短。这种试剂能够检测早期的血清阳转， 缩短了检测的窗口期， 进一步提高了输血的安全性。
我国国产三代的ELISA试剂和四代HIV检测试剂起步较晚， 但是近年来随着我国科技的迅速发展。到1994 年， 卫生部检定并批准了国产二代HIV-1/ HIV-2 抗体酶标诊断试剂盒。目前国内主要流行的第三代试剂，但是有很多厂家已经推出自己研制的第四代试剂。从1998 年起，根据卫生部要求， 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心国家艾滋病参比实验室对国内的HIV诊断试剂进行临床质量评估， 为国内的HIV诊断试剂用户提供质量信息，诊断试剂进行了连续8年的试剂考评， 得出国产HIV抗体诊断试剂质量的总体水平在逐年提高的结论； 特别是从2000年开始， 国产HIV 诊断试剂从第二代ELISA 间接法筛查试剂提升到第三代双抗原夹心法筛查试剂， 敏感性和特异性已接近国外同类产品水平。目前第四代试剂可同时检测血清中HIV的p24 抗原和抗体。
结论
当今血液安全的最大隐患是HIV窗口期感染。研究表明， 使用第四代HIV试剂可使窗口期可缩短4到5天。同时第四代试剂在检测低滴度的血清标本时其反应性更强，意味着有更高的灵敏度，可以有效的避免漏检， 从而及时筛查出可疑的HIV感染者。但是第四代试剂特异性低于第三代试剂， 使得检测结果出现很多的假阳性，从而增加了工作的复杂性，可对于血液安全却是非常重要的。
参考文献
[1] 王梓，张立红.第四代与第三代HIV诊断试剂检测结果比较[J].中国误诊学杂志，2011，11（3）：577.
[2] 陈豪.预防窗口期献血者导致输血传播人类免疫缺陷病毒的方法[J].检验医学与临床，2013，10（7）：873-874.
[3] 许文燕，邱茂锋，佐合拉·吐尔地，邢文革，蒋岩. 第四代HIV抗原抗体酶联检测试剂缩短HIV检测窗口期的研究[J]. 中华检验医学杂志. 2007（03）
[4] 张麒，佐拉，秦光明，孙显光，许文燕，闫红梅，邢文革，蒋岩. 评估第4代HIV酶联免疫法诊断试剂对静脉吸毒者感染窗口期的检测能力[J]. 中华检验医学杂志. 2006（07）
[5] 许四宏，李秀华，宋爱京，李敬云，鲍作仪，貌盼勇，王佑春. 第4代HIV抗原抗体联合检测试剂的评价[J]. 中国输血杂志. 2006（03）