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摘要：高致病性猪繁殖与呼吸综合征（TJM-F92株）活疫苗是目前市场上预防猪蓝耳病应用最多、最广泛的疫苗株之一。为提高该产品质量，我们在生产过程中严控各个环节的质量控制点，从原辅材料的产地、来源、质量，培养瓶的处理，细胞代次及密度的严控，到生产用水质量，培养基的营养强化，细胞病变程度的掌握，半成品保存时间的控制，及冻干曲线的改进等一系列环节严格把关，使产品质量达到高效、稳定、安全、可靠的良好状态，效价高于国家标准。
关健词：高致病性猪繁殖；呼吸综合征活疫苗；质量控制点；效价
高致病性猪蓝耳病（PRRS）是近年来严重危害我国养猪业的传染病之一，患病猪死亡率相当高，给养猪业造成巨大的经济损失，我国将其列为二类动物传染病，2011年农业部将其列为强制免疫范围。蓝耳病灭活苗因副反应较重，其应用效果并不理想。
1 生产用原辅材料的控制
在原材料筛选方面我们做过大量的对比试验，取得了理想的效果。生产中使用的主要原料全部是进口产品，在生产前对原材料样品进行检验，各项指标经检验合格后再批量购买，主要原材料做到保持合理库。主要原材料如MEM、新生牛血清、NaHCO3、 NZ-Amine AS、 Glutamic Acid产自Gibco，225水解明胶产自Sigma，蔗糖产自德国Merck，胰酶产自Difco，水解乳蛋白产自美国BD，乙二胺四乙酸二钠产自荷兰阿克苏。
2 细胞培养瓶经严格处理
细胞培养瓶每次使用后都要严格经过洗刷、晾干、浓硫酸-重铬酸钾洗液浸泡过夜、磷酸三钠碱液中和、40℃左右热水冲洗25次、纯水冲洗10次、注射用水冲洗10次、70℃烘干、硫酸纸包扎、160℃干热灭菌程序，方可进入下一次使用。
细胞瓶是细胞赖以贴附生长的外部环境，细胞能否良好贴壁生长，细胞瓶洗刷质量是关键因素，以上各个环节认真执行方能为细胞更好地生长创造条件。
3 细胞质量及代次控制
生产用Marc-145细胞必须来源和历史清晰，并进行无菌、支原体、外源病毒、胞核学及致瘤性进行检验，各项指标均符合2010版《中华人民共和国兽药典》要求，为保证产品效价稳定，细胞传代控制在30代以内。
4 细胞密度及传代周期控制
细胞密度控制在适宜范围内其繁殖能力和产毒效果才能达到最佳状态，细胞密度过于致密和稀薄都不利于其复制和产毒，作为种子的健康细胞密度控制在4～6×107/ml，用于接毒的细胞密度控制在2～3×107/ml比较适宜。细胞生长有一定的周期，要在细胞生长最旺盛的对数生长期进行传代，培养48～72小时较适宜。
5 生产用水的质量控制
水的质量直接影响细胞的生长，病毒的繁殖，进而影响产品质量。细胞苗生产所用的水应是二次蒸馏水或纯化水高压后再通过Milli-Q超纯水仪过滤，电阻率达到18.2MΩ的超纯水。生产用水必须定期进行监测，各项指标合格后方可使用。
6 病毒维持液的营养强化
MEM维持液中加入0.5%（W/V）水解乳蛋白，有利于病毒繁殖及病毒活力的保持。传统生产方式细胞维持液中不加水解乳蛋白，改进生产工艺后，病毒毒价提高0.5个滴度左右。2011022-2011026批不含水解乳蛋白的半成品每毫升TCID50为107.33、107.67、107.5、107.5、107.17，含水解乳蛋白的半成品每毫升TCID50为107.83、108.33、108.17、108.0、107.83。
7 细胞病变程度掌握
接毒后24小时出现CPE，一般在48～54小时细胞病变达75%～80%，收毒太早或太晚，都会影响半成品的效价。
8 半成品保存方式及保存时间的控制
8.1 半成品保存方式半成品收获后，按维持液总量的10%加入冻干保护剂，加入保护剂的量是配苗时所加保护剂的一半，加入保护剂后半成品在冷冻保存过程中毒价损失大幅度减少。从2011027批至2011031批半成品未加保护剂-20℃保存10天测得每毫升TCID50为 107.5、107.67、107.33、107.5、107.33；加保护剂-20℃保存10天测得每毫升TCID50为107.83、108.33、108.17、108.0、107.83。
8.2 半成品保存时间在半成品置于-20℃冷库中保存10天，即半成品检验结束后迅速冻干，这样可以最大限度地减小半成品效价的损失。以2011023批半成品为例，每隔5天测定一次半成品效价，结果表明在15天内效价变化不明显，在20天后效价下降在1.33个滴度。
该产品的国家标准是≥107.0TCID50/ml，我公司生产的半成品效价能达到国家标准的10倍左右。
9 结语
高致病性猪蓝耳病（TJM-F92株）活疫苗为基因缺失疫苗，其突出的优点是不存在疫苗间的免疫干扰性，该产品在众多蓝耳病活疫苗产品中对猪的保护效果具有明显的优势，其免疫效果确实，抗体产生快，安全性可靠，怀孕母猪及仔猪均可安全使用，有效地控制了蓝耳病的发病率。
参考文献
[1] 于向前，王克雄等.用切向流超滤的方法浓缩蓝耳病灭活疫苗半成品的研究报告[J].畜牧兽医科技信息. 2010（08）
关健词：高致病性猪繁殖；呼吸综合征活疫苗；质量控制点；效价
高致病性猪蓝耳病（PRRS）是近年来严重危害我国养猪业的传染病之一，患病猪死亡率相当高，给养猪业造成巨大的经济损失，我国将其列为二类动物传染病，2011年农业部将其列为强制免疫范围。蓝耳病灭活苗因副反应较重，其应用效果并不理想。
1 生产用原辅材料的控制
在原材料筛选方面我们做过大量的对比试验，取得了理想的效果。生产中使用的主要原料全部是进口产品，在生产前对原材料样品进行检验，各项指标经检验合格后再批量购买，主要原材料做到保持合理库。主要原材料如MEM、新生牛血清、NaHCO3、 NZ-Amine AS、 Glutamic Acid产自Gibco，225水解明胶产自Sigma，蔗糖产自德国Merck，胰酶产自Difco，水解乳蛋白产自美国BD，乙二胺四乙酸二钠产自荷兰阿克苏。
2 细胞培养瓶经严格处理
细胞培养瓶每次使用后都要严格经过洗刷、晾干、浓硫酸-重铬酸钾洗液浸泡过夜、磷酸三钠碱液中和、40℃左右热水冲洗25次、纯水冲洗10次、注射用水冲洗10次、70℃烘干、硫酸纸包扎、160℃干热灭菌程序，方可进入下一次使用。
细胞瓶是细胞赖以贴附生长的外部环境，细胞能否良好贴壁生长，细胞瓶洗刷质量是关键因素，以上各个环节认真执行方能为细胞更好地生长创造条件。
3 细胞质量及代次控制
生产用Marc-145细胞必须来源和历史清晰，并进行无菌、支原体、外源病毒、胞核学及致瘤性进行检验，各项指标均符合2010版《中华人民共和国兽药典》要求，为保证产品效价稳定，细胞传代控制在30代以内。
4 细胞密度及传代周期控制
细胞密度控制在适宜范围内其繁殖能力和产毒效果才能达到最佳状态，细胞密度过于致密和稀薄都不利于其复制和产毒，作为种子的健康细胞密度控制在4～6×107/ml，用于接毒的细胞密度控制在2～3×107/ml比较适宜。细胞生长有一定的周期，要在细胞生长最旺盛的对数生长期进行传代，培养48～72小时较适宜。
5 生产用水的质量控制
水的质量直接影响细胞的生长，病毒的繁殖，进而影响产品质量。细胞苗生产所用的水应是二次蒸馏水或纯化水高压后再通过Milli-Q超纯水仪过滤，电阻率达到18.2MΩ的超纯水。生产用水必须定期进行监测，各项指标合格后方可使用。
6 病毒维持液的营养强化
MEM维持液中加入0.5%（W/V）水解乳蛋白，有利于病毒繁殖及病毒活力的保持。传统生产方式细胞维持液中不加水解乳蛋白，改进生产工艺后，病毒毒价提高0.5个滴度左右。2011022-2011026批不含水解乳蛋白的半成品每毫升TCID50为107.33、107.67、107.5、107.5、107.17，含水解乳蛋白的半成品每毫升TCID50为107.83、108.33、108.17、108.0、107.83。
7 细胞病变程度掌握
接毒后24小时出现CPE，一般在48～54小时细胞病变达75%～80%，收毒太早或太晚，都会影响半成品的效价。
8 半成品保存方式及保存时间的控制
8.1 半成品保存方式半成品收获后，按维持液总量的10%加入冻干保护剂，加入保护剂的量是配苗时所加保护剂的一半，加入保护剂后半成品在冷冻保存过程中毒价损失大幅度减少。从2011027批至2011031批半成品未加保护剂-20℃保存10天测得每毫升TCID50为 107.5、107.67、107.33、107.5、107.33；加保护剂-20℃保存10天测得每毫升TCID50为107.83、108.33、108.17、108.0、107.83。
8.2 半成品保存时间在半成品置于-20℃冷库中保存10天，即半成品检验结束后迅速冻干，这样可以最大限度地减小半成品效价的损失。以2011023批半成品为例，每隔5天测定一次半成品效价，结果表明在15天内效价变化不明显，在20天后效价下降在1.33个滴度。
该产品的国家标准是≥107.0TCID50/ml，我公司生产的半成品效价能达到国家标准的10倍左右。
9 结语
高致病性猪蓝耳病（TJM-F92株）活疫苗为基因缺失疫苗，其突出的优点是不存在疫苗间的免疫干扰性，该产品在众多蓝耳病活疫苗产品中对猪的保护效果具有明显的优势，其免疫效果确实，抗体产生快，安全性可靠，怀孕母猪及仔猪均可安全使用，有效地控制了蓝耳病的发病率。
参考文献
[1] 于向前，王克雄等.用切向流超滤的方法浓缩蓝耳病灭活疫苗半成品的研究报告[J].畜牧兽医科技信息. 2010（08）