【摘 要】
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目的 探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1 protein,HMGB1)基因的表达对机械牵张诱导肺泡巨噬细胞(alveolar macrop
【机 构】
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广州市第一人民医院麻醉科,广东广州,510180;
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目的 探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1 protein,HMGB1)基因的表达对机械牵张诱导肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)细胞因子释放的影响.方法 将HMGB1 siRNA真核表达质粒(siHMGB1)在脂质体介导下转染AM,以转染siRNA-A质粒的细胞作为阴性对照.实验分为4组,siHMGB1未牵张组、siHMGB1牵张组、siRNA-A未牵张组和siRNA-A牵张组.将牵张组Bioflex弹性膜细胞培养板置于Flexercell 4000T应力加载系统中,给予细胞施加20%牵张应变,牵张频率为30次/min,牵拉/松弛比为1:1,牵张时间为24 h.采用RT-PCR和West blot检测HMGB1 mRNA和蛋白表达,应用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测细胞培养上清中细胞因子浓度.结果 转染后与siRNA-A转染组比较,siHMGB1转染组细胞HMGB1 mRNA和蛋白表达均显著下降(P<0.05);siHMGB1转染细胞可显著抑制机械牵张诱导的IL-1 、IL-6、MIP-2、MCP-1、IFN-γ和IP-10释放(P<0.05).结论 应用RNA干扰(RNAi)技术可以有效抑制HMGB1 mRNA和蛋白的表达,进而抑制机械牵张诱导的细胞因子释放,为机械通气所致肺损伤(ventilator-induced lung injury,VILI)的基因治疗提供新思路.
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