人端粒酶催化亚单位mRNA的实时荧光RT-PCR定量检测

• 作 者: 郭颖 刘军 薛采芳 吴静 宋天保
• 机 构: 西安交通大学第二医院妇产科,陕西,西安,710001第四军医大学病原生物学教研室,陕西,西安,710032;西安交通大学医学院组胚学教研室,陕西,西安,710061
• 出 处: 细胞与分子免疫学杂志
• 发表日期: 2004年5期
• 关键词: 实时PCR 人端粒酶催化亚单位 端粒酶
• 基金项目: 陕西省自然科学基金

目的:建立可定量测定人端粒酶催化亚单位(hTERT)mRNA的实时荧光反转录PCR方法.方法:用Trizol 试剂从HepG2细胞中分离总RNA,然后反转录为cDNA.利用一对基因特异引物和一条TaqMan MGB探针,以实时荧光PCR定量hTERT的cDNA.同时定量测定人β-肌动蛋白(hBA)的mRNA作为内对照.用梯度稀释的克隆的人β-肌动蛋白基因制作标准曲线.结果:标准曲线的相关系数为1.00.实时荧光反转录PCR方法的平均变异系数为7.1%.HepG2细胞hTERT mRNA与hBA mRNA的比值为(1.3±0.3)×10-4.结论:建立了可定量测定人端粒酶催化亚单位(hTERT)mRNA的实时荧光反转录PCR方法.本方法的建立将有助于研究端粒酶的生物功能.