【摘 要】
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将抗菌肽之一的蜂毒溶血肽(Melittin)基因序列定向克隆到表达载体pESP-2中,构建GST-Melittin融合蛋白.利用载体上严格受硫胺素浓度调控的启动子Pnmtl,采用先扩大培养后诱导表
【机 构】
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重庆大学,生物工程学院,重庆,400044
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将抗菌肽之一的蜂毒溶血肽(Melittin)基因序列定向克隆到表达载体pESP-2中,构建GST-Melittin融合蛋白.利用载体上严格受硫胺素浓度调控的启动子Pnmtl,采用先扩大培养后诱导表达的两步培养法,实现了融合蛋白在裂殖酵母Schizosaccharomyces Pombe中的异源表达.然后通过GST亲和层析法一步纯化得到融合肽.研究中1 L培养液收集到约5 g鲜活酵母菌.纯化得到400/μg融合蛋白,融合蛋白经SDS-PAGE和Westem blot验证,表明蜂毒肽融合蛋白已在裂殖酵母中高效的表达,并可以通过GST亲和层析法得到有效纯化.初步的活性实验证明所获得Melittin蛋白对Escherichia Coli DH5α菌种有良好的抑菌效果.
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