蜘蛛拖丝蛋白基因逆转录病毒载体构建与检测

• 作 者: 安铁洙 宁方勇 王春生 朴善花 梁洋
• 机 构: 东北林业大学生命科学学院,东北农业大学动物科学技术学院
• 出 处: 中国兽医学报
• 发表日期: 2013年1期
• 关键词: 蜘蛛拖丝蛋白基因 逆转录病毒载体 重组逆转录病毒 spider dragline silk protein gene retroviral vector r
• 基金项目: 国家自然科学基金资助项目（30771538,31000990,30771538）

利用pIRES2-EGF和pMX载体以及前期获得的蜘蛛拖丝蛋白基因（2S）构建逆转录病毒载体pMX-2S-IRES-EGFP。采用磷酸钙法将pMX-2S-IRES-EGFP质粒转染到PlatE细胞并获得重组逆转录病毒。通过小鼠成纤维细胞系NIH3T3检测病毒侵染能力,并采用PCR法检测蜘蛛拖丝蛋白基因在NIH-3T3细胞的整合状况。结果显示,成功构建了逆转录病毒载体pMX-2S-IRES-EGFP;通过感染NIH-3T3细胞测定重组逆转录病毒滴度约为2×105 cfu/mL;PCR鉴定结果显示,