产气荚膜梭菌菌落多重PCR方法的建立及初步应用

• 作 者: 董洁 杨晓静 苗承霞 沈晶 杨柳 姜艳芬 许信刚
• 机 构: 西北农林科技大学动物医学院
• 出 处: 中国兽医学报
• 发表日期: 2013年12期
• 关键词: 产气荚膜梭菌 菌落多重PCR 血清型 Clostrldiurn perfringens Colony multiplex PCR serotype
• 基金项目: 基金项目：陕西省科学研究发展计划农业攻关项目（2011K01-10）,西北农林科技大学博士启动基金资助项目（2010BSJJ011）,西北农林科技大学“大学生创新性实验计划”资助项目（2201110712053）

根据GenBank中已发布的产气荚膜梭菌α、β、ε、τ毒素基因序列，分别设计并合成针对4种毒素基因的特异引物，通过优化多重PCR反应条件，建立1种简单的产气荚膜梭菌定型菌落多重PCR方法。结果显示：A、B、C、D、E5型产气荚膜梭菌参考菌株均扩增出了相应的预期目的条带，而大肠杆菌、巴氏杆菌和芽孢杆菌则均未能扩增出相应条带；将单个菌落稀释100倍，仍能扩增出相应的目的片段，该方法对B型和E型参考菌株最低检测量分别为2．6×10^4cfu／mL、1．2×10^4cfu／mL。应用该多重PC