【摘 要】
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目的 探讨外源hTERT基因转染对大鼠供肝冷缺血再灌注损伤的防护作用.方法 将表达hTERT蛋白的重组腺病毒rAd-hTERT转染试验组大鼠,同时设空载体对照组及空白对照组.组1(n=25)
【机 构】
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山东大学齐鲁医院肝脏移植中心,南京医科大学第一附属医院肝脏移植中心,山东大学医学分子生物学实验中心
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目的 探讨外源hTERT基因转染对大鼠供肝冷缺血再灌注损伤的防护作用.方法 将表达hTERT蛋白的重组腺病毒rAd-hTERT转染试验组大鼠,同时设空载体对照组及空白对照组.组1(n=25)大鼠供体取肝前48 h前阴茎背静脉目的基因干预实验组;组2(n=25)空载体病毒干预实验组;组3(n=25)注射等体积生理盐水;供肝切取置于UW液中修整保存6 h后移植给同种大鼠.移植后3,6,12,24,48 h分别取材进行相关检测,检测各组血清内ALT水平,端粒酶活性的测定,普通光镜和电镜下观察组织学变化,TUNEL法检测细胞凋亡.结果 hTERT预处理组术后3,6,12,24,48 h血清ALT较生理盐水组明显降低(P＜0.05),而空载体组和生理盐水组之间无差异;hTERT预处理可以显著提高供肝的端粒酶的活性,24 h达到空载体对照组的(177.03±7.24)%(P＜0.05);和hTERT组相比较,其他两组移植肝均表现出严重的小梁结构的破坏,门静脉周围的水肿以及空泡样变性.电镜检测也发现生理盐水组、空载体组的肝细胞内有大量的空泡,线粒体严重肿胀的现象;和生理盐水组及空载体组相比较,hTERT组的TUNEL阳性细胞明显减少,其凋亡指数和其他两组相比亦明显减少(P＜0.05).结论 腺病毒载体可成功介导hTERT基因对大鼠移植肝的转染;hTERT基因转染预处理能够减轻冷缺血再灌注损伤,hTERT的作用主要是通过上调端粒酶活性而抑制细胞凋亡来实现的.
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