【摘 要】
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目的 探索可溶性丙型肝炎病毒(HCV) E2糖蛋白对人活化CD4+T细胞的免疫调节作用.方法 真核表达质粒pcDNA3.1-HCV sE2转染HEK293T细胞,细胞培养上清经Ni-NTA树酯亲和层析纯化可
【机 构】
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湖北医药学院基础医学院免疫学教研室,湖北十堰442000湖北医药学院胚胎干细胞研究湖北省重点实验室,湖北十堰442000;湖北恩施州中心医院临床检验中心,湖北恩施,445000;
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目的 探索可溶性丙型肝炎病毒(HCV) E2糖蛋白对人活化CD4+T细胞的免疫调节作用.方法 真核表达质粒pcDNA3.1-HCV sE2转染HEK293T细胞,细胞培养上清经Ni-NTA树酯亲和层析纯化可溶性HCV E2蛋白.应用流式细胞术分选健康捐献者外周血CD4+T细胞,经1.0 μg/mL小鼠抗人CD3单克隆抗体、1.0 μg/mL小鼠抗人CD28单克隆抗体刺激培养48 h.刺激后的CD4+T细胞分成空白对照组、(2、5、10) μg/mL HCV E2蛋白组,后者经HCV E2糖蛋白处理.培养36 h后,流式细胞术检测CD4+T细胞程序性死亡蛋白1(PD-1)的表达变化,ELISA检测细胞培养上清液肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γy干扰素(IFN-γ)的水平.结果 与空白对照组比较,HCV E2蛋白组CD4+T细胞PD-1表达轻微降低,但差异无统计学意义.与空白对照组比较,可溶性E2蛋白组CI4+T细胞分泌TNF-α水平明显降低,并呈剂量依赖性;可溶性E2蛋白组CD4+T细胞分泌IFN-γy水平明显降低,但高低剂量组无明显差异.结论 可溶性HCV E2蛋白抑制人活化CD4+T细胞促炎细胞因子的分泌.
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