【摘 要】
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目的 探讨黄芩苷对转化生长因子β1 (TGF-β1)诱导的A549细胞自噬作用的影响.方法 采用不同浓度TGF-β1 (2.5、5、10 ng· mL-1)诱导A549细胞48 h后,检测其Collagen Ⅰ基因与自噬相关基因表达水平,以确定模型复制的最佳条件.在高、中、低剂量(200、100、50 μg·mL-1)黄芩苷对TGF-β1诱导的A549细胞模型干预后,采用RT-qPCR法检测细胞的肺纤维化标志基因Collagen Ⅰ及自噬相关基因(ATG3、ATG5、ATG7、ATG12)的表达;West
【机 构】
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山东中医药大学药学院,山东济南250355;山东省即墨市中医院,山东青岛266200;山东中医药大学中医学院,山东济南250355;山东中医药大学中医药创新研究院,山东济南250355;山东省高校中医
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目的 探讨黄芩苷对转化生长因子β1 (TGF-β1)诱导的A549细胞自噬作用的影响.方法 采用不同浓度TGF-β1 (2.5、5、10 ng· mL-1)诱导A549细胞48 h后,检测其Collagen Ⅰ基因与自噬相关基因表达水平,以确定模型复制的最佳条件.在高、中、低剂量(200、100、50 μg·mL-1)黄芩苷对TGF-β1诱导的A549细胞模型干预后,采用RT-qPCR法检测细胞的肺纤维化标志基因Collagen Ⅰ及自噬相关基因(ATG3、ATG5、ATG7、ATG12)的表达;Western Blot法检测自噬调节标志蛋白p62、LC3B Ⅱ/Ⅰ的表达;通过转染Ad-mCherry-GFP-LC3B双荧光标记腺病毒检测细胞中自噬流的情况.结果 使用10 ng·mL-1TGF-β1诱导A549细胞48 h后,Collagen Ⅰ基因表达显著上调,ATG3、ATG5、ATG7、ATG12基因表达明显下调,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).经黄芩苷干预后,与模型组相比,黄芩苷高剂量组(200 μg· mL-1)A549细胞的Collagen Ⅰ基因表达显著下调(P＜0.01),ATG3、ATG5、ATG7、ATG12基因表达明显上调(P＜0.05);黄芩苷各给药组A549细胞的p62蛋白表达显著下调(P＜ 0.05,P＜0.01),LC3B Ⅱ/Ⅰ蛋白表达显著上调(P＜ 0.05,P＜0.01);黄芩苷高剂量组的细胞自噬能力明显激活.结论 黄芩苷可能在减少TGF-β1诱导的A549细胞外基质沉积的同时,能够增强细胞的自噬水平,可能是治疗肺纤维化的有效成分.
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