【摘 要】
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目的 研究缺氧条件下多形核髓源性抑制细胞来源外泌体(PMN-MDSC-EX)对胶原蛋白诱导性关节炎(CIA)的治疗作用.方法 通过牛2型胶原蛋白(Col2)和佐剂构建CIA小鼠模型,并从小鼠脾
【机 构】
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南京中医药大学附属南京医院(南京市第二医院)检验科,江苏南京210009;南京医科大学附属逸夫医院检验科,江苏南京211100
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目的 研究缺氧条件下多形核髓源性抑制细胞来源外泌体(PMN-MDSC-EX)对胶原蛋白诱导性关节炎(CIA)的治疗作用.方法 通过牛2型胶原蛋白(Col2)和佐剂构建CIA小鼠模型,并从小鼠脾脏中磁珠分选PMN-MDSC,提取常氧(210 mL/L O2)和缺氧(10 mL/L O2)条件下培养的PMN-MDSC上清中的外泌体.通过透射电镜观察其超微结构、流式粒径分析测定其粒径、Westem blot法检测CD9、CD63、热休克蛋白70(HSP70)、钙连蛋白(calnexin)的蛋白表达鉴定PMN-MDSC-EX.将PMN-MDSC-EX加入体外CD4+T细胞的增殖体系中观察其免疫抑制能力.CIA小鼠尾静脉注射PMN-MDSC-EX,每3d对小鼠进行关节评分,HE染色检测小鼠关节病变情况,ELISA测定小鼠血清中总IgG、Col2抗体、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素17(IL-17)水平.实时定量PCR检测正常和缺氧条件下PMN-MDSC-EX中miR-29a-3p和miR-93-5p的含量.结果 成功分选出CIA小鼠脾脏中的PMN-MDSC,并制备了正常和缺氧条件下PMN-MDSC-EX.与正常氧含量PMN-MDSC-EX相比,缺氧条件下PMN-MDSC-EX可更强的抑制CD4+T细胞的增殖.缺氧PMN-MDSC-EX处理组CIA小鼠足趾红肿程度,临床评分,关节破坏程度都明显减低,血清中总IgG、Col2抗体、IFN-γ、 IL-17水平也明显降低.与正常氧含量PMN-MDSC-EX相比,缺氧条件下PMN-MDSC-EX中miR-29a-3p和miR-93-5p的含量更高.结论 缺氧条件下PMN-MDSC-EX免疫抑制能力更强,可以更有效地缓解CIA小鼠的发病.
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